| 研究概要 |
染色体DNA鎖切断修復には複数の多様な経路が存在しているが,さまざまなDNA鎖切断に対する各経路の役割分担やこれを制御する仕組みについては明らかにされていない.そこで本研究では,我々が最近開発したヒトNalm-6細胞を使った逆遺伝学的解析システムを利用して,染色体DNA鎖切断修復に関わる遺伝子のノックアウト細胞を系統的に作製し,得られた変異細胞の表現型を解析することにより,鎖切断に対するヒト細胞の応答・修復機構を明らかにすることを目的として研究を行った.本年度は,DNA鎖切断修復に関わる遺伝子を系統的にノックアウトし,計画していたほとんどの遺伝子についてホモ変異細胞の作製を完了することができた.次に得られた変異細胞の詳細な解析,特にコロニーアッセイ法や増殖阻害アッセイ法による薬剤感受性解析を行い,相同組換え経路と非相同末端連結経路との相対的役割に関する新たな知見を得た.また,カンプトテシンやエトポシドなどのトポイソメラーゼ阻害剤が誘発する一本鎖・二本鎖切断に対して各経路がどのように応答するかを解析した.その結果,トポイソメラーゼ1阻害剤によるダメージに対しては相同組換え経路が,トポイソメラーゼ2阻害剤によるダメージに対しては非相同末端連結経路が重要であること,また非相同末端連結に関わるエンドヌクレアーゼであるアルテミスがDNA ligase IVとは独立した機能を担っていることを明らかにすることができた.
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