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テロメアは、真核生物の線状染色体の末端を構成し、染色体機能の安定化を介して遺伝情報の恒常性に関与する。これまで我々は出芽酵母をモデルにした解析を行い、テロメアに局在化するタンパグ質複合体の細胞周期における動的変化、およびその変化のテロメアキャッピング機能と複製機能の調整への関与を見いだしている。今年度は、テロメア構成タンパク質のうち、一本鎖DNA結合活性をもつCdc13-Stn1-Ten1複合体に注目し、その動態と制御に関する解析を進めた。以下に今年度得た知見について述べる。
1.Stn1の細胞周期におけるリン酸化制御
Stn1はテロメア複製が進行とともにSDS-PAGEにおける泳動度の遅い分子種が出現することを発見した。この移動度の変化はStn1におきるリン酸化修飾が原因であることを見いだした。遺伝学的な解析からこのリン酸化にはATMファミリータンパク質Tel1とMec1、およびCdkであるCdc28が関わっている可能性が示唆された。また、この修飾がテロメラーゼによるテロメア伸張を制御していることが示された。
2.Stn1の網羅的改変体の作成
Stn1は複数の細胞周期キナーゼによって多重にリン酸化を受けている可能性がある。Stn1のSer、Thr残基を網羅的に非リン酸化アミノ酸であるAla残基に置換し、プラスミドシャフリングにより正常型Stn1と置き換えた株を作成した。この中には、テロメア長制御異常など、テロメア代謝の異常をもつものが含まれていることが明らかになった。
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