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ゼブラフィッシュ側線器官は個体発生のある時期に、細胞集団がプラコードとして形成された後、"移動"、"細胞集団の分離と定着"、"細胞の分化"が連続して起こることが知られている。我々は側線器官発生に重要なこの3要素(移動、細胞集団の分離と定着、細胞の分化)に注目し、そこに関わるシグナル伝達経路の分子機構の解明を目指している。本年度は以下の成果を得た。
1)側線発生におけるNotchシグナルの機能解析
Notchシグナル関連分子の側線発生における機能を調べるため、種々の遺伝子に対するモルフォリノアンチセンスを作成し、ゼブラフィッシュ受精卵に注入することで、各遺伝子の機能を発生過程で阻害した。その結果、Jaggedlbの機能阻害で、側線プラコードの"細胞集回の分離と定着"に異常をきたすことが分かった。しかしながら側線プラコードの"移動"や"細胞の分化"に異常はないことが分かってきた。これまでにDelta-Notchシグナルの側線発生時の機能として、有毛細胞と支持細胞の分化決定が知られているが、Jagged-Notchシグナルは側線の発生において、側線プラコード細胞集団同土の接着や分離のタイミング制御といった、Delta-Notchとは異なる機能を持つ可能性が示唆された。
2)側線発生に異常のある変異体の作成と単離
化学変異剤ENUを用いてランダムに変異を導入したオスと野生型メスを交配し、F1を作成後、それらF1同土を交配し、F2ファミリーを作成した。今後は側線の発生に異常のある変異体のスクリーニングを開始する。具体的には、F2ファミリー同士を交配し、F3受精卵を得る。このF3受精卵を発生させ、5日胚をDASPEIで側線細胞を染色し、蛍光顕微鏡下で観察する。側線細胞の数や形態に異常がある変異体を単離する。
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