| 研究課題/領域番号 |
18109001
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
松田 彰 北海道大学, 大学院・薬学研究院, 教授 (90157313)
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| 研究分担者 |
原島 秀吉 北海道大学, 大学院・薬学研究院, 教授 (00183567)
南川 典昭 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス, 教授 (40209820)
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| キーワード | ヌクレアーゼ抵抗性核酸 / 2'-O-メチル-4'-チオリボヌクレオシド / 4'-チオDNA / MEND / siRNA / ホタルルシフェラーゼ / Dicer / リポソーム |
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| 研究概要 |
2'-OMe-4'-thio体(MeS)の位置および数を変えた21mer siRNAおよびDicer基質となる25mer siRNAを合成した。それらをMEND(リポソーム)に搭載しホタルルシフェラーゼを強制発現させたHeLa細胞で活性評価を行った。antisense鎖の修飾は活性を大幅に減弱させたがsense鎖は両末端3-5残基の修飾が許容であった。一方、48時間後のIC_<50>値を比較すると、最も低活性であったのは未修飾21mer siRNA(31.7nM)であり、最も高活性であったのはsense鎖の5'-末端5残基と3'-末端2残基をMeSで修飾したDicer基質siRNA(11.3nM)であった。活性の持続は、未修飾21mer siRNAのそれを1とすると、最も高活性な修飾型Dicer基質は1.63倍であり、活性の立ち上がりが速く、持続時間も長い結果を得た。一方、4'-thioDNAを含むshRNA発現ベクター(ヌクレアーゼ抵抗性人工DNAデバイス)は、ルシフェラーゼ遺伝子の一部に4'-thioDNA(40mer)を組み込み、NIH3T3細胞に導入後ルシフェラーゼ活性を測定した。その結果、すべて天然型DNAプラスミドの活性を100とすると、2種類のヌクレオチド(ATまたはGC)を4'-thio体にした場合には最大40%の活性が観察された。従って、4'-thioDNAがマウス細胞中のRNA polIIで転写されたことが明らかになった。一方、in vivo実験を可能とするMENDの開発で、エンドソームからの脱出を効果的にするshort GALA(ペプチド)をMEND膜上に装着することによってsiRNAの抗腫瘍活性が増強された。
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