| 研究課題/領域番号 |
18209006
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
橋田 充 京都大学, 薬学研究科, 教授 (20135594)
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| 研究分担者 |
山下 富義 京都大学, 薬学研究科, 准教授 (30243041)
川上 茂 京都大学, 薬学研究科, 助教 (20322307)
樋口 ゆり子 京都大学, 薬学研究科, 研究員 (40402797)
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| キーワード | 遺伝子デリバリー / プラスミドDNA / サイトカイン / NFκB / エンドソーム / リポソーム / ポリマー / 癌 |
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| 研究概要 |
本年度は、遺伝子キャリアデザインを目的としたイメージングによる評価法の確立ならびにこれまで最適化を行ってきた遺伝子キャリアシステムの治療への応用をおこなった。まず、遺伝子が標的部位へ到達後、遺伝子発現効率密接な関係をもつ遺伝子の細胞内動態をイメージングにより行った。プラスミドDNAを量子ドットまたは蛍光分子(FITCおよびTMR)により修飾を行った。サイトカイン産生細胞であるマクロファージを用いて、カチオン性リポソーム、カチオン性ポリマー、キトサンなどのキャリアと複合体を形成させ、エンドソームや核などの細胞内器官を蛍光染色することによりプラスミドDNAの細胞内動態を経時的に評価したところ、エンドソームに滞留時間の短いキャリアは長いキャリアと比較しNFκBの活性化およびサイトカインの産生が抑制されることが明らかとなった。またこれらのキャリアとプラスミドDNAの複合体をマウス尾静脈より投与後の血清中のサイトカイン産生及びALT/AST値はエンドソーム滞留時間の長いキャリアに比べ短いキャリアにおいて低いことが明らかとなった。従って細胞内動態の改善により遺伝子発現およびNFκB活性化並びにサイトカイン産生を制御できる可能性が示唆された。そこで、癌の免疫療法の確立を目的にプラスミドDNAによるNFκB活性化抑制可能なATRA封入リポソームを用いてIL12産生プラスミドDNAとの複合体を調製し、肺への癌細胞転移モデルマウスへ投与したところ癌細胞数の有意な減少並びに生存期間の延長が認められた。以上、最終年度である本年は、プラスミドDNAの細胞内動態から得られた情報を遺伝子キャリア開発へ応用し肺への癌転移モデルを用いて治療効果を得た。
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