| 研究概要 |
[目的]プリオン病は脳に異常プリオン(PrPSc)が蓄積し神経細胞死を来す難病である。未知分子シャペロンXの仲介で正常プリオン(PrPC)が高次構造変換されてPrPScを生ずる。Xの正体を解明出来れば、PrPC-PrPSc変換阻害薬の開発が可能となる。本研究(研究期間2年)は、新しいタンパク質問相互作用解析法プロテインマイクロアレイ(protein microarray)を用いて、ヒトPrPCに結合するタンパク質(PrPC-interacting proteins ; PIP : X候補)を網羅的に解析、結合部位を同定、プリオン病病態解明・早期診断法・分子標的薬開発に役立てることを目標とする。
[方法・結果]1.PrPC特異的probe作成:PrPC23-231をpSecTag/FRT/V5-His TOPOにクローニング、Flp-In-293細胞に導入、培養上清中に分泌されたrecombinant human V5-tagged glycosylated PrPCを精製し濃縮した。2.プロテインアレイ解析:ProtoArray Hmman Protein Microarray v3.0(5,000proteins ; Invitrogen)を上記プローブおよび抗V5 Alexa Fluor 647抗体と反応、GenePix4200Aで特異的蛍光シグナルを検出、Prospector 3.0 softwareで解析、50種類のPIPを同定した。2種類のPrPに関しては免疫沈降法でPrPCとPIPの結合特異性を検証、共焦点顕微鏡でPrPCとPIPの細胞内共存を確認した。しかし1種類のPPに関してはmammalian two-hybddsystem(M2H ; Promega)では結合を確認出来なかった。
[結論]プロテインマイクロアレイ解析で50種類のPIPを同定した。現在、ヒト中枢神経系組織におけるPIPの発現分布および機能を解析中である。
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