| 研究課題/領域番号 |
18370001
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| 研究機関 | 埼玉大学 |
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研究代表者 |
井上 弘一 埼玉大学, 大学院理工学研究科, 教授 (60114203)
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| 研究分担者 |
田中 秀逸 埼玉大学, 大学院理工学研究科, 助教授 (90202431)
畠山 晋 埼玉大学, 科学分析支援センター, 講師 (00396665)
五味 勝也 東北大学, 大学院農学研究科, 教授 (60302197)
阿部 敬悦 東北大学, 大学院農学研究科, 助教授 (50312624)
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| キーワード | 遺伝子ターゲッティング / 非相同組換え / 糸状菌 |
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| 研究概要 |
井上らはNeurosporaではすでにKu70,Ku80ノックアウト株で遺伝子のターゲット率が100%になることを示した。この結果を元に染色体の多くの部位でのターゲット実験を試みた。また、米国のDunlapのグループでは、Kuノックアウト株で、転写因子を網羅的に破壊する計画を行い、多くの変異株を作成した。いずれのケースも染色体上の遺伝子を例外なく高率でノックアウトできることを示した。非相同末端結合に関わるLig4遺伝子を破壊した株においてもターゲット効率を調べる実験を行った所、相同部分を短くしても高率でターゲットができることが明らかになった。Aspergillus nidulansでもKu80,Lig4の相同遺伝子を破壊し,その株において遺伝子ターゲット実験を行った所、80%以上の高率で相同部分への組み込みがおこっていた。破壊株については現在マイクロアレイ解析をおこなっている。A. oryzaeではLig4の破壊株を作成し、この株で転写因子やプロテアーゼをコードしている多数の遺伝子を破壊する実験を行った所、アカパンカビの場合と同様ほとんどの場合で100%の相同組み込みがみられた。この結果が他のカビでも一般的におこるかどうかを調べるため、担子菌のPhanerocaete chrysosporiumにおけるLig4ホモログ遺伝子の探索を行い、その遺伝子を破壊するための基礎実験として形質転換法をこのカビで開発することを目指し実験を行っている。また、植物のArabidopsisのLig4変異株を用いてターゲット効率を調べる実験を行っているが、細胞への遺伝子導入が困難で、また植物は結果がでるのに時間がかかることもあり苦戦している。
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