研究課題
基盤研究(B)
私たちは、最近、分裂期にCdk1がChk1のSer286・Ser301をリン酸化していることを報告しているが、本研究において、Chk1のSer301に対する抗リン酸化抗体を作製し、解析を進めた。この抗リン酸化抗体を用いて細胞を染色すると、分裂期に、Ser301がリン酸化されたChk1が、核外へ移行する所見が得られた。すなわち、chk1が分裂期にcdk1によってリン酸化されることによって、核外に排出される可能性があることを見出した。また私たちは、ケラチンフィラメント上だけでなく細胞間接着部位にも局在し、接着と骨格の両面に関与すると見られる新規蛋白質トリコプレインと、それに類似する蛋白質アルバトロスについても解析を進めた。トリコプレインは中心体にも局在し、中心体では母中心小体の遠位端に限局していることを認めた。トリコプレインの発現を減弱させた状態で微小管再形成実験を行ったところ、中心体への微小管のアンカリングが阻害されていることを見出した。以上のことから、トリコプレインは母中心小体の遠位端にも存在し、微小管の安定化に必要であることがわかった。また新規ケラチン結合蛋白質アルバトロスは、極性化した上皮細胞ではapical junctional complex(AJC)の近傍に局在した。そして、そのノックダウン実験では上皮細胞の極性化、つまりAJCおよびラテラル(側面)ドメインの局在化が障害された。また、ケラチン欠損上皮細胞にケラチンを発現させたところ、albatrossおよびAJC構成分子の細胞間への局在が著しく促進された。
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