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1、トランスジーン挿入によって胚性致死変異を示す新規マウス劣性変異体を得た。得られた変異体の表現型の浸透度を調べたところ、ほぼメンデル率に沿って、表現型が認められた。トランスジーン挿入部位を同定するため、染色体FISH法を行ったところ、第2番染色体上に1箇所導入されていた。インパースPCR法により、挿入箇所の塩基配列を決定したところ、トランスジーンはExt2遺伝子のイントロンに挿入されていた。実際、ホモ変異胚においては、Ext2遺伝子のmRNA及びタンパク質とも、失われていた。更に、Ext2は、生化学的にヘパラン硫酸鎖の重合に働いているが、ホモ変異胚では、プロテオグリカンのヘパラン硫酸鎖付加に異常が見られた。次に、Ext2欠損が胚性致死の原因であるか検討するため、Ext2遺伝子のcDNAのみを発現するトランスジェニックマウスを作成したところ、ホモ変異体でもExt2を発現させると、正常に発生し、成長することが分かった。以上の結果から、今回得られた、劣性致死変異の原因遺伝子は、Ext2遺伝子であることが強く示唆された。2、Ext2ホモ変異胚の表現型を、組織切片レベルで解析したところ、変異体では、胚性6日目までには、異常がみとめられ、10日目まで、致死となることが分かった。特に、胚体外外胚葉、中胚葉に顕著な形成不全が見られた。更に、領域特異的な各種分子マーカーを用いて詳細に解析したところ、胚体外外胚葉領域が全く形成されていないこと、中胚葉は形成され、epithelial mesenchymal transitionも起こるが、脱上皮化した細胞が、適切に移動出来ないこと、後方神経上皮が全く誘導されないこと等が明らかになった。一方、ホモ変異胚において、エピブラスト、臓側内胚葉、前方中内胚葉、前方神経上皮などは、ある程度正常に形成されていた。
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