研究課題
今回の研究において、クローンギンブナCD8αおよびCD4分子に対するモノクローナル抗体(mAb)の作製に成功した。そこで、これらのmAbを用いてT細胞サブセットを分取し機能解明を試みた。1.魚類CD8陽性(CD8^+)T細胞の特性及び傷害機構の解析:CD4陽性細胞は細胞傷害活性を全く示さず、CD8α^+細胞のみがアロ抗原特異的に強い細胞傷害活性を示した。一方、sIgM^+細胞も細胞傷害活性を示したがアロ抗原特異的ではなくNK細胞によるものと思われた。細胞の傷害にはターゲット細胞との接触が必要であり、アポトーシスを誘導し、パーフォリン依存的傷害経路の阻害剤であるEGTAあるいはコンカナマイシンAの添加により細胞傷害活性が抑制された。また、ギンブナにおける3種類のパーフォリンのうちパーフォリン-1の発現増強が感作後のCD8α^+細胞において認められた。以上より、CD8α^+細胞による傷害にはCA^<2+>依存性のパーフォリンを介した傷害経路が重要な役割を果たすことが示された。2.移植片対宿主病(GVHD)におけるCD8+T細胞の役割解明:感作ドナー細胞移植7日目のレシピエントにおいてドナー肉来CD4^+T細胞の著しい増加が認められ、続いてCD8^+T細胞の増加が認められた。CD8^+T細胞を除いた白血球移植群ではGVHDの発症及び死亡個体は認められなかった。以上のことから、魚類においてもCD8^+T細胞が急性GVHDの誘導において主要な役割を果たしていることが示された。3.ウイルス感染細胞における免疫関連遺伝子の発現解析:クローンギンブナ由来鰭細胞より4種類のMHCクラスI遺伝子を単離し、フナ造血器壊死症ウイルス(CHNV)感染後の発現について解析した。その結果、4種類のMHCクラスI遺伝子のうち2種類の遺伝子が、ウイルスが顕著に増殖する以前の感染後3〜6時間後に高い発現を示した。遺伝子の構造及び発現よりこれらの遺伝子が古典的MHCクラスI遺伝子として抗原の提示に関与していることが示唆された。
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