オーファン受容体を介して分泌されるペプチド、蛋白質の解析と生理機能の解明

2006 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18390024
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 平澤 明 京都大学, 薬学研究科, 助教授 (70242633)
• 研究分担者: 淡路 健雄 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (60297546) ; 早野 俊哉 立命館大学, 情報理工学部, 教授 (90332303)
• キーワード: オーファン受容体 / 脂肪酸 / 分泌 / ペプチド / 脂肪酸受容体 / 質量分析 / プロテオーム

研究概要

オーファン受容体のリガンド探索研究としては、リガンド探索の報告が未だに無い受容体5種類について、独自の細胞内局在変化の検出系によるリガンド探索を行った。各受容体をGFPとの融合蛋白質としてTREx-293細胞誘導発現可能な系を確立した。これらの細胞について、各種化合物添加時のGFP蛍光の細胞内局在変化を定量化することによりスクリーニングを行った。その結果、GTO2について添加により細胞表面上の受容体が細胞内へ移行するインターナリゼーションを惹起するリガンド候補化合物群を見いだし、現在、他の情報伝達系の解析等を含めて詳細な確認の実験を行っている段階である。またこのGTO2の発現する血球系の細胞株を、公共データベースに登録されたマイクロアレイデータの検索から予測し、RT-PCRで確認した。シグナル伝達と生理機能についての検討をするため、siRNAの発現ベクターを用いた抑制実験系、GTO2大量発現系、および、抗GTO2抗体の作成を行い生理機能解析のために必要な完了した。
脂肪酸がリガンドであることを既に見いだしているGPR120をモデルに、この受容体を介した刺激によりGLP-1を分泌をするSTC-1細胞を用いて分泌ペプチド・蛋白質の回収とプロファイルの解析を行った。培養上清を濃縮後、二次元電気泳動・銀染色を行うことにより蛋白質の同定を行った。現在、脂肪酸刺激前後での発現量の変動が認められる複数の蛋白質について質量分析による同定を行っている段階である。

研究成果

• [雑誌論文] The regulation of adipogenesis through GPR120 (2007)
  • 著者名/発表者名: Gotoh C, Hong YH, Iga T, Hishikawa D, Suzuki Y, Song SH, Choi KC, Adachi T, Hirasawa A, Tsujimoto G, Sasaki S, Roh SG.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 354(2) ページ: 591-597
• [雑誌論文] Glucocorticoid-induced alternative promoter usage for a novel 5' variant of granzyme A. (2007)
  • 著者名/発表者名: Ruike Y, Katsuma S, Hirasawa A, Tsujimoto G.
  • 雑誌名: J Hum Genet. 52(2) ページ: 172-178
• [雑誌論文] Monitoring ligand-mediated internalization of G protein-coupled receptor as a novel pharmacological approach. (2006)
  • 著者名/発表者名: Fukunaga S, Setoguchi S, Hirasawa A, Tsujimoto G.
  • 雑誌名: Life Sci. 80(1) ページ: 17-23
• [雑誌論文] Developmental aberrations of liver gene expression in bovine fetuses derived from somatic cell nuclear transplantation. (2006)
  • 著者名/発表者名: Herath CB, Ishiwata H, Shiojima S, Kadowaki T, Katsuma S, Ushizawa K, Imai K, Takahashi T, Hirasawa A, Takahashi S, Izaike Y, Tsujimoto G, Hashizume K..
  • 雑誌名: Cloning Stem Cells. 8(2) ページ: 79-95
• [雑誌論文] Free fatty acids administered into the colon promote the secretion of glucagon-like peptide-1 and insulin. (2006)
  • 著者名/発表者名: Adachi T, Tanaka T, Takemoto K, Koshimizu TA, Hirasawa A, Tsujimoto G.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 340 ページ: 332-337