C型肝炎ウイルス培養系による感染増殖効率規定因子の解析と新規治療標的候補の探索

2008 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 18390225
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 脇田 隆字 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 部長 (40280789)
• 研究分担者: 伊達 朋子 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 研究員 (40392360) ; 森川 賢一 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 協力研究員 (60384377) ; 相崎 英樹 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (00333360) ; 村上 恭子 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (30399456) ; 石井 孝司 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (40280763) ; 鈴木 亮介 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (50342902)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2008
• キーワード: HCV / ウイルス / 感染実験 / ウイルス複製 / インターフェロン

研究概要

C型肝炎ウイルス(HCV)感染症は持続感染化して慢性肝炎から肝硬変、肝臓癌に至る疾患を引き起こす。HCVはプラス鎖RNA をゲノムとするウイルスであり、ウイルスゲノムの変異が多い。ウイルスゲノムの変異がウイルスの持続感染化に関与すると考えられているがその詳細は不明である。HCVの研究はウイルス培養系が存在せず、感染性ウイルスを用いた研究ができなかった。我々が分離したJFH-1株は培養細胞で感染および増殖複製が世界で初めて可能であることを報告した。本研究では、HCVがどのような機構で感染増殖効率を規定しているかを解析し、ウイルス複製増殖に関与する、ウイルス側および宿主側因子を同定した。この研究により、新たな抗ウイルス戦略の標的を探索した。

研究成果

• [雑誌論文] Involvement of creatine kinase B in hepatitis C virus genome replication through interaction with the viral NS4A protein. (2009)
  • 著者名/発表者名: Hara H, 他10名 Wakita T, Suzuki T.
  • 雑誌名: J Virol. 83(10) ページ: 5137-47
• [雑誌論文] Hepatitis C Virus Infection of T Cells Inhibits Proliferation and Enhances Fas-Mediated Apoptosis by Down-Regulating the Expression of CD44 Splicing Variant 6. (2009)
  • 著者名/発表者名: Kondo Y, 他4名Wakita T, Shimosegawa T, Lai MM.
  • 雑誌名: J Infect Dis. 199(5) ページ: 726-736
• [雑誌論文] Virus RNA Replication through Modulation of the Glutathione Redox System and Oxidative Stress. (2009)
  • 著者名/発表者名: Kuroki M, 他3名 Wakita T, Kato N.
  • 雑誌名: J Virol. 83(5) ページ: 2338-48
• [雑誌論文] Proteasomal Turnover of Hepatitis C Virus Core Protein Is Regulated by Two Distinct Mechanisms: a Ubiquitin-Dependent Mechanism and a Ubiquitin-Independent but PA28{gamma}-Dependent Mechanism. (2009)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, 他5名Wakita T, Miyamura T, Matsuura Y, Suzuki T.
  • 雑誌名: J Virol. 83(5) ページ: 2389-92
• [雑誌論文] Cellular vimentin content regulates the protein level of hepatitis C virus core protein and the hepatitis C virus production in cultured cells. (2009)
  • 著者名/発表者名: Nitahara-Kasahara Y, 他5名 Wakita T, Hanada K, Miyamura T, Nishijima M.
  • 雑誌名: Virol. 383(2) ページ: 319-27
• [雑誌論文] Development of plaque assays for hepatitis C virus-JFH1 strain and isolation of mutants with enhanced cytopathogenicity and replication capacity. (2008)
  • 著者名/発表者名: Sekine-Osajima Y, 他9名Wakita T, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: Virol. 371(1) ページ: 71-85
• [雑誌論文] Characterization of infectious hepatitis C virus from liver -derived cell lines. (2008)
  • 著者名/発表者名: Akazawa D, 他10名 Wakita T.
  • 雑誌名: BBRC. 377(3) ページ: 747-51
• [雑誌論文] Hepatitis C virus infection sensitizes human hepatocytes to TRAIL -induced apoptosis in a caspase 9-dependent manner. (2008)
  • 著者名/発表者名: Lan L, 他7名 Wakita T, 他5名
  • 雑誌名: J Immunol. 181(7) ページ: 4926-35
• [雑誌論文] Hepatitis C virus JFH-1 strain infection in chimpanzees is associated with low pathogenicity and emergence of an adaptive mutation. (2008)
  • 著者名/発表者名: Kato T, 他6名 Wakita T, Krawczynski K, Liang TJ.
  • 雑誌名: Hepatology. 48(3) ページ: 732-40
• [雑誌論文] The DNA damage sensors ataxia-telangiectasia mutated kinase and checkpoint kinase 2 are required for hepatitis C virus RNA replication. (2008)
  • 著者名/発表者名: Ariumi Y, 他4名 Wakita T, Kato N.
  • 雑誌名: J Virol. 82(19) ページ: 9639-46
• [雑誌論文] Virological characterization of the hepatitis C virus JFH -1 strain in lymphocytic cell lines. (2008)
  • 著者名/発表者名: Murakami K, 他5名 Wakita T, Shoji I.
  • 雑誌名: J Gen Virol. 89(7) ページ: 1587-92
• [雑誌論文] Interaction of hepatitis C virus nonstructural protein 5A with core protein is critical for the production of infectious virus particles. (2008)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, 他8名 Wakita T, Suzuki T.
  • 雑誌名: J Virol. 82(16) ページ: 7964-76
• [雑誌論文] Intragenotypic JFH1 based recombinant hepatitis C virus produces high levels of infectious particles but causes increased cell death. (2008)
  • 著者名/発表者名: Mateu G, Donis RO, Wakita T, Bukh J, Grakoui A.
  • 雑誌名: Virol. 376(2) ページ: 397-407
• [雑誌論文] Trans-encapsidation of hepatitis C virus subgenomic replicon RNA with viral structure proteins. (2008)
  • 著者名/発表者名: Ishii K, 他8名 Wakita T, Suzuki T.
  • 雑誌名: BBRC. 371(3) ページ: 446-50
• [雑誌論文] Infection of human hepatocyte chimeric mouse with genetically engineered hepatitis C virus and its susceptibility to interferon. (2007)
  • 著者名/発表者名: Hiraga N, 他15名 Wakita T, Chayama K.
  • 雑誌名: FEBS Lett. 581(10) ページ: 1983-7
• [雑誌論文] CD81 expression is important for the permissiveness of Huh7 cell clones for heterogeneous hepatitis C virus infection. (2007)
  • 著者名/発表者名: Akazawa D, 他8名Wakita T.
  • 雑誌名: J Virol. 81(10) ページ: 5036-45
• [雑誌論文] Production of infectious hepatitis C virus of various genotypes in cell cultures. (2007)
  • 著者名/発表者名: Kato T, 他5名Wakita T, Liang TJ.
  • 雑誌名: J Virol. 81(9) ページ: 4405-11
• [雑誌論文] The roles of CD81 and glycosaminoglycans in the adsorption and uptake of infectious HCV particles. (2007)
  • 著者名/発表者名: Morikawa K, 他7名Wakita T.
  • 雑誌名: J Med Virol. 79(6) ページ: 714-23
• [雑誌論文] Borras-Cuesta F, Lasarte JJ, Prieto J. Upregulation of indoleamine 2,3-dioxygenase in hepatitis C virus infection. (2007)
  • 著者名/発表者名: Larrea E, 他9名Wakita T
  • 雑誌名: J Virol. 81(7) ページ: 3662-6
• [雑誌論文] An infectious and selectable full-length replicon system with hepatitis C virus JFH-1 strain. (2007)
  • 著者名/発表者名: Date T, 他8名Wakita T.
  • 雑誌名: Hepatol Res. 37(6) ページ: 433-43
• [雑誌論文] E6AP ubiquitin ligase mediates ubiquitylation and degradation of hepatitis C virus core protein. (2007)
  • 著者名/発表者名: Shirakura M, 他12名Wakita T, Suzuki T, Howley PM, Miyamura T, Shoji I.
  • 雑誌名: J Virol. 81(3) ページ: 1174-85
• [雑誌論文] Hepatitis C virus non-structural proteins responsible for suppression of the RIG-I/Cardif-induced interferon response. (2007)
  • 著者名/発表者名: Tasaka M, 他9名Wakita T, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Gen Virol. 88 ページ: 3323-33
• [雑誌論文] Scavenger receptor class B type I is a key host factor for hepatitis C virus infection required for an entry step closely linked to CD81. (2007)
  • 著者名/発表者名: Zeisel MB, 他5 名Wakita T, 他11名
  • 雑誌名: Hepatology. 46(6) ページ: 1722-1731
• [雑誌論文] DDX3 DEAD-box RNA helicase is required for hepatitis C virus RNA replication. (2007)
  • 著者名/発表者名: Ariumi Y, 他4名Wakita T, Kato N.
  • 雑誌名: J Virol. 81(24) ページ: 13922-6
• [雑誌論文] The lipid droplet is an important organelle for hepatitis C virus production. (2007)
  • 著者名/発表者名: Miyanari Y, 他6名Wakita T, Hijikata M, Shimotohno K.
  • 雑誌名: Nat Cell Biol. 9(9) ページ: 1089-97
• [雑誌論文] Robust production of infectious viral particles in Huh-7 cells by introducing mutations in hepatitis C virus structural proteins. (2007)
  • 著者名/発表者名: Delgrange D, 他5名Wakita T, Duverlie G, Wychowski C.
  • 雑誌名: J Gen Virol. 88(9) ページ: 2495-503
• [雑誌論文] Monitoring the antiviral effect of alpha interferon on individual cells. (2007)
  • 著者名/発表者名: Kim CS, Jung JH, Wakita T, 他2名
  • 雑誌名: J Virol. 81(16) ページ: 8814-20
• [雑誌論文] The NS3 helicase and NS5B-to-3'X regions are important for efficient hepatitis C virus strain JFH-1 replication in Huh7 cells. (2007)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, 他9名Wakita T.
  • 雑誌名: J Virol. 81(15) ページ: 8030-40
• [雑誌論文] Infection of human hepatocyte chimeric mouse with genetically engineered hepatitis C virus and its susceptibility to interferon. (2007)
  • 著者名/発表者名: Hiraga N, 他15名Wakita T, Chayama K.
  • 雑誌名: FEBS Lett. 581(10) ページ: 1983-7
• [雑誌論文] Establishment of an infectious genotype 1b hepatitis C virus clone in human hepatocyte chimeric mice. (2007)
  • 著者名/発表者名: Kimura T, 他16名 Wakita T, Okamoto T, Matsuura Y, Chayama K.
  • 雑誌名: J Gen Virol. 89(9) ページ: 2108-13
• [雑誌論文] Cell culture and infection system for hepatitis C virus. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kato T, 他4名 Wakita T.
  • 雑誌名: Nat Protoc. 1(5) ページ: 2334-9
• [雑誌論文] Replication of a hepatitis C virus replicon clone in mouse cells. (2006)
  • 著者名/発表者名: SL Uprichard, J Chung, FV Chisari, T Wakita.
  • 雑誌名: Virology J. 3 ページ: 89
• [雑誌論文] Regulation of CXCL-8 (Interleukin 8) Induction by dsRNA Signaling Pathways During Hepatitis C Virus Infection. (2006)
  • 著者名/発表者名: Wagoner J, 他6名Wakita T, Gale M Jr, Polyak SJ.
  • 雑誌名: J Virol. 81(1) ページ: 309-18
• [雑誌論文] Hepatitis C virus entry depends on Clathrin-Mediated Endocytosis. (2006)
  • 著者名/発表者名: E Blanchard, S Belouzard, L Goueslain, T Wakita, 他3名
  • 雑誌名: J Virol, 80(14) ページ: 6964-72
• [雑誌論文] Generation of infectious hepatitis C virus in immortalized human hepatocytes. (2006)
  • 著者名/発表者名: T Kanda, A Basu, R Steele, T Wakita, 他3名
  • 雑誌名: J Virol. 80(9) ページ: 4633-9
• [雑誌論文] Characterization of the replication sensitivity to cyclosporin A among strains of hepatitis C virus. (2006)
  • 著者名/発表者名: N Ishii, 他5名 T Wakita, N Kato, K Shimotohno.
  • 雑誌名: J Virol, 80(9) ページ: 4510-20
• [雑誌論文] A novel virus culture system for hepatitis C virus. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kato T, Date T, Miyamoto M, Wakita T.
  • 雑誌名: Future Virology 1 ページ: 519-525
• [雑誌論文] Subcellular localization of hepatitis C virus structural proteins in a cell culture system that efficiently replicates the virus. (2006)
  • 著者名/発表者名: Y Rouille, 他9名T Wakita, C Wychowski, J Dubuisson.
  • 雑誌名: J Virol. 80(6) ページ: 2832-41
• [雑誌論文] Production of infectious genotype 1a hepatitis C virus (Hutchinson strain) in cultured human hepatoma cells. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yi M, Villanueva RA, Thomas DL, Wakita T, Lemon SM.
  • 雑誌名: PNAS. 103(7) ページ: 2310-5
• [学会発表] C型肝炎ウイルスのウイルス培養とワクチン開発 (2008)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 学会等名: 第67回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場
  • 年月日: 20081028-30
• [学会発表] ATM DNA損傷センサーはC型肝炎ウイルスのRNA複製に必要である (2008)
  • 著者名/発表者名: 有海康雄、他4名、脇田隆字、加藤宜之
  • 学会等名: 第67回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場
  • 年月日: 20081028-30
• [学会発表] creatine kinase BはC型肝炎ウイルスNS4Aとの相互作用によりウイルスゲノム複製複合体へ運ばれエネルギー供給に働く (2008)
  • 著者名/発表者名: 原弘道、相崎英樹、他5名、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第56回学術集会
  • 発表場所: 岡山コンベンションセンター
  • 年月日: 20081026-28
• [学会発表] HCV粒子形成におけるNS5A蛋白の役割 (2008)
  • 著者名/発表者名: 政木隆博、鈴木亮介、村上恭子、相崎英樹、石井孝司、村山麻子、伊達朋子、松浦善治、宮村達男、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第56回学術集会
  • 発表場所: 岡山コンベンションセンター
  • 年月日: 20081026-28
• [学会発表] In silicoscreeningによるHCV NS3プロテアーゼ阻害化合物の検索 (2008)
  • 著者名/発表者名: 山下篤哉、他6名、脇田隆字、梅山秀明、横山茂之、榎本信幸、伊藤正彦
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第56回学術集会
  • 発表場所: 岡山コンベンションセンター
  • 年月日: 20081026-28
• [学会発表] 培養細胞で作製した感染性C型肝炎ウイルス粒子の免疫原性の解析およびワクチン応用への可能性 (2008)
  • 著者名/発表者名: 森川賢一、脇田隆字
  • 学会等名: 第44回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 愛媛県県民文化会館
  • 年月日: 20080605-06
• [学会発表] HCV JFH-1株のチンパンジーへの感染実験 : in vivo適応変異の機能的解析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 加藤孝宣、三代俊治、脇田隆字
  • 学会等名: 第44回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 愛媛県県民文化会館
  • 年月日: 20080605-06
• [学会発表] HCV culture system and antiviral development (2008)
  • 著者名/発表者名: T Wakita.
  • 学会等名: 21^<st> International Conference on Antiviral Research (ICAR)
  • 発表場所: Montreal, Quebec, Canada
  • 年月日: 20080413-17
• [学会発表] C型肝炎ウイルス研究の最先端 (2008)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 学会等名: 第12回日本肝臓学会大会
  • 発表場所: グランドプリンスホテル新高輪
  • 年月日: 2008-10-01
• [学会発表] Hepatitis C virus replication and virus particle formation, Symposium: Emerging Viruses and the Control of Viruses (2008)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: XIVth International Congress of Virology, IUMS
  • 発表場所: Istanbul, Turkey
  • 年月日: 2008-08-15
• [学会発表] C型肝炎ウイルス研究の進展 : ウイルス増殖からワクチン開発へ (2008)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 学会等名: 第134回日本医学会シンポジウム「感染症をめぐる最近の話題」
  • 発表場所: 日本医師会館
  • 年月日: 2008-07-17
• [学会発表] C型肝炎ウイルスに対するワクチン開発、 (2007)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 学会等名: 第11回日本ワクチン学会学術集会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 20071208-09
• [学会発表] 遺伝子型2a/2b間でのキメラウイルスの作製および性状解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 伊達朋子、村山麻子、赤澤大輔、森川賢一、石井孝司、野本明男、鈴木哲朗、脇田隆字
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第55回学術集会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター
  • 年月日: 20071021-23
• [学会発表] HCV JFH-1株の複製および感染性ウイルス粒子形成に重要な領域の解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 村山麻子、伊達朋子、赤澤大輔、森川賢一、石井孝司、鈴木哲朗、脇田隆字
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第55回学術集会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター
  • 年月日: 20071021-23
• [学会発表] HCV JFH-1株のin vivoでの病原性の検討 (2007)
  • 著者名/発表者名: 加藤孝宣、脇田隆字
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第55回学術集会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター
  • 年月日: 20071021-23
• [学会発表] 肝細胞株における感染性HCV粒子の作製と性状解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 赤澤大輔、伊達朋子、森川賢一、他5名、脇田隆字
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第55回学術集会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター
  • 年月日: 20071021-23
• [学会発表] The important regions for RNA replication and infectious virus particle formation of JFH-1 (2007)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Date T, Morikawa K, Akazawa D, Ishii K, Wakita T
  • 学会等名: 14th International Meeting on Hepatitis C and Related Viruses.
  • 発表場所: Glasgow, Scotland, UK
  • 年月日: 20070909-13
• [学会発表] Characterization of infectious HCV particles produced from various liver-derived cell lines (2007)
  • 著者名/発表者名: Akazawa D, Takahashi H, Omi N, Date T, Morikawa K, Murayama A, Nakamura N, Mochizuki H, Wakita T
  • 学会等名: 14th International Meeting on Hepatitis C and Related Viruses.
  • 発表場所: Glasgow, Scotland, UK
  • 年月日: 20070909-13
• [学会発表] Analysis of NS5A region for hepatitis C virus particle production (2007)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Suzuki R, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T
  • 学会等名: 14th International Meeting on Hepatitis C and Related Viruses.
  • 発表場所: Glasgow, Scotland, UK
  • 年月日: 20070909-13
• [学会発表] Critical roles of virion-associated cholesterol and sphingolipids in the viral infectivity (2007)
  • 著者名/発表者名: T Wakita, H Aizaki
  • 学会等名: The 7^<th> Awaji International Forum on Infection and Immunity
  • 発表場所: The Hyogo Prefecture Awaji Yumebutai International Conference Center
  • 年月日: 20070901-05
• [学会発表] 脂質のC型肝炎ウイルス感染、粒子形成における役割 (2007)
  • 著者名/発表者名: 相崎英樹、原弘道、森川賢一、宮村達男、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 第43回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: ホテルグランパシフィックメリディアン
  • 年月日: 20070531-0601
• [学会発表] Infection and replication of hepatitis C virus (2007)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 学会等名: アジア太平洋消化器病週間 Asian Pacific Digestive Week 2007サテライトシンポジウム
  • 発表場所: 神戸商工会議所会館
  • 年月日: 2007-10-17
• [学会発表] C型肝炎のウイルス培養系の開発とその応用 (2007)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 学会等名: 第43回肝形態科学研究会
  • 発表場所: ホテルグランパシフィックメリディアン
  • 年月日: 2007-05-30
• [図書] Isolation of JFH-1 strain and development of an HCV infection system. In : Hepatitis C Methods and Protocols Second Edition (ed. by Hengli Tan) Methods Mol Biol. (2009)
  • 著者名/発表者名: Wakita T.
  • 総ページ数: 305-27
  • 出版者: Human Press
• [図書] Development of an Infectious HCV Cell Culture System. In : Hepatitis C Viruses Genomes and Molecular Biology (ed. by Tan, S -L.) (2006)
  • 著者名/発表者名: Kato T and Wakita T.
  • 総ページ数: 451-464
  • 出版者: Horizon Bioscience