| 研究課題/領域番号 |
18390350
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
中村 雅史 九州大学, 大学院・医学研究院, 准教授 (30372741)
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| 研究分担者 |
赤司 浩一 九州大学, 大学病院, 教授 (80380385)
片野 光男 九州大学, 大学院・医学研究院, 教授 (10145203)
野村 政壽 九州大学, 大学病院, 助教 (30315080)
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| キーワード | cancer stem cell / 形態形成シグナル / paclitaxel / 乳癌 / 薬剤耐性 / Notch / DAPT / 大腸癌 |
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| 研究概要 |
(目的)薬剤排出機構が強力に活性化しているcancer stem cell(CSC)は、癌細胞のheterogeneityを作り出す発生源として想定されている。このCSC機構を解明し制御法を確立する事が本研究課題の目的である。(材料と方法)2種の乳癌細胞株(MCF-7、MDA-MB231)を用いて、各種抗癌剤、形態形成シグナルの異なる活性化状態下でのCSC存在率の変化を調べた。CSC分画としては、Hoechst33342の染色性をもとに分離したSP(side population)分画か、もしくはCD24-/lowCD44+発現を指標に分離したCD24-/lowCD44+分画を用いた。これらを用いて形態形成シグナルの活性度・依存性解析を行った。また、大腸癌stem cell factor候補であるNotchシグナル阻害剤DAPTによる薬剤感受性への影響を調べた。(結果)前年度分離に成功した、乳癌細胞株中のSP分画に加え、CD24-/lowCD44+分画の同定にも成功し、同分画にも薬剤耐性能があることが明らかになったた。SP分画とCD24-/lowCD44+分画は、かなりの部分が重なっていることが確認できた。両分画ともにHedgehog(Hh)シグナルの転写因子であり標的遺伝子でもあるGli1が、CSCでない分画(non SP,もしくはnon CD24-/lowCD44+分画)に比較して有意に高いことが明らかとなった。また、Hh阻害剤であるcyclopamineによりSP分画、もしくはCD24-/lowCD44+分画のHh活性を阻害することでこれらのCSC分画が減少することが判明した。'乳癌細胞中のCSC分画維持のためにはHhシグナルが必要であることは、Hhシグナルのeffectorである転写因子Gli1をノックアウトすることで確認された。乳癌細胞中のGli1をSiRNAでノックアウトすることにより、全細胞数に占めるSP分画、もしくはCD24-/lowCD44+分画の割合が減少することが観測された。ところで、乳腺上皮の分化マーカーでもあるER刺激でHhシグナルが活性化することも明らかになった。Hhが、分化とCSCという相反する状況で活性化する生物学的意味は現在解析中である。大腸癌細胞にDAPTを作用させることで薬剤耐性を克服できることが明らかになった。これは、APC変異依存性におきている可能性が示唆された。(結語)乳癌細胞中のCSC分画候補であるSP分画とCD24-/lowCD44+分画は、たがいにかなりの部分が重複することが明らかになった。また、乳癌CSC分画の維持にはHhシグナルが必要であることが示唆された。DAPTにより大腸癌の薬剤耐性が克服できる可能性が示唆された。
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