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1)SCA14由来変異γPKC-GFPの特性をさらに明らかにし、神経変性に至る分子機序を明らかにする。
1.変異γPKCが凝集体を形成する分子メカニズムをPKCのターゲティングを指標に明らかにする。
従来研究を行っていた上皮細胞系のCHO細胞のみならず、神経細胞由来の培養細胞株、初期培養プルキンエ細胞においても、SCA14由来変異γPKCは凝集体を形成することが明らかになった。また、凝集体を形成していない細胞において、変異γPKCの流動性が減少していることが明らかになった。
2.変異PKCの凝集体形成がどのように神経細胞死を引き起こすのか、その分子機序を明らかにする。
変異γPKCは細胞質内にドット上の凝集を作り、やがて核周辺に集積し塊状となることが明らかとなった。また、凝集体を有する細胞は、プロテアソームの活性が減少し、ERストレスが誘発されることが明らかになった。
2)SCA14由来変異γPKC-GFPを誘導発現できる細胞株作製し、薬物スクリーニング系を構築する。さらに構築したスクリーニング系で実際に凝集体形成を減弱する薬物探索を行う。
Gene Switchシステムを用いて、変異γPKC-GFPを誘導発現できる細胞株作製した。さらにアデノウイルスベクターを用いて神経由来培養細胞株に変異γPKC-GFPを発現させ、凝集体の形成や細胞死を評価できる実験系を確立した。2糖類のトレハロースが、変異γPKC-GFPの凝集体形成と細胞死を抑制することを明らかにした。
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