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これまでにCSNが核内でタンパク質分解を調節して、生体内の情報伝達を制御することが判明している。一方、遺伝学や生化学的解析とCSN過剰発現および機能欠損変異体との組み合わせから、タンパク質分解調節のみでは説明できない知見が蓄積している。そこでCSNの制御メカニズム解明を目的に、CSNと直接相互作用する因子群を単離した結果、全く新規の結合因子としてmRNAの代謝に関わる因子群を動物培養細胞の系より複数同定している。
平成18年度は、同定された結合候補を手がかりに、植物で個体レベルの研究を展開し、CSNの新たな制御機構を解明することを目的とした。その結果次のことを解明したので報告する。
1.動物の系で生化学的網羅解析によりCSN1結合因子候補として同定されたSAP130(spliceosome associated protein130)が、シロイヌナズナでCSN1と直接結合することを、共沈を用いたin vitro実験系、yeast-two-hybridを用いたin vivoの実験系で明らかにした。同時に、シロイヌナズナSAP130遺伝子の単離と発現系の確立を行なった。
2.シロイヌナズナのSAP130遺伝子が第3番染色体上に2コピー存在し、その両遺伝子の発現は検証された全ての器官で確認された。また、一方が他方より優位に発現していることから、次年度は、作製や同定が進むSAP130の過剰発現株や機能欠損変異株と組み合わせた、詳細な解析を予定する。
3.シロイヌナズナCSN1、SAP130のN末端、C末端特異的に認識するペプチド抗体を作製し、その特異性を確認した。次年度はこれを用いて、タンパク質レベルにおける発現解析と、各々のタンパク質の可視化による相互作用解析を進める。
以上の成果の一部は、ZOMES-IV、日本分子生物学会2006フォーラム、日本植物生理学会年会において報告した。
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