研究課題
本研究課題ではウエストナイルウイルス(WNV)感染症の日本への侵入に備えて、フラビウイルスの同一血清型群に属する日本脳炎ウイルス(JEV)とWNV感染症との鑑別診断法を開発するための基礎的研究を行った。前年度、WNVとJEVの各中空粒子を抗原としたELISAやIFA、ウエスタンブロッティング法等の実験室内診断法により、各ウイルス感染マウス血清を鑑別出来ることを示した。本年度は、フラビウイルス属の感染鑑別に最も有効であるとされるウイルス中和試験について検討した。WNVあるいはJEVを感染させたヒヨコ血清を用いて生ウイルスを用いた中和試験を行った。その結果、各ウイルス感染ヒヨコ血清は各ウイルスを特異的に中和した。古典的な中和試験では生ウイルスを使用するため、WNV等の病原体レベル3の病原体の検査はバイオセーフティーレベル(BSL)3実験室で行わなければならない。また、感染事故が起こる危険性もあるため、より安全なWNVの検査法の開発が求められている。そこで、生ウイルスの代替としてウイルス様粒子(VLP)のウイルス中和試験への使用可能性について検討することを目的に、各種レポーター蛋白質を発現するVLPの作製を試みた。VLPはウイルス構造蛋白質のコーディング領域を欠くRNA(レプリコン)を内包するウイルス様の粒子構造体である。レプリコンとウイルス構造蛋白質を細胞に共発現することにより、培養上清中にVLPが産生される。今回は蛍光色素や分泌型アルカリフォスファターゼ遺伝子をレプリコンに導入し、これらのレポーター蛋白質が発現するVLPを作製した。また、粒子の殻がWNV(VLP-WNV)あるいはJEV(VLP-JEV)の構造蛋白質で構成されるVLPの作製に成功した。現在、VLP-WNVおよびVLP-JEVを用いて、通常のBSL2実験室で実施可能な中和試験法の開発を行っている。
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Journal of Virological Methods 148
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Epidemiology and Infection (印刷中)
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