| 研究概要 |
タンパク質中のアスパラギンやアスパラギン酸残基は、異性化やラセミ化を起しやすく、劣化に伴いイソアスパラギン酸やD-アスパラギン酸に変換される。一方、異性化やラセミ化を起したタンパク質の修復酵素としてprotein isoaspartate/D-aspartate o-methyltransferase (PIMT)が知られている。本研究では、PIMTの生理的役割を解明する目的で、その発現抑制株を樹立し解析を行っている。その結果、PIMT発現抑制株においてはコントロール細胞に比較し、EGF刺激後のRaf-1,MEK,ERKのリン酸化の亢進が認められた。現在は、EGFシグナル伝達系に異常亢進が認められるメカニズムの解明に向け、更なる解析を行っている。
また、PIMTの発現および活性調節機構を解明する目的で、簡便なPIMTの活性測定系の開発を行った。本測定系を用いて、野生株およびPIMT発現抑制株におけるPIMT活性を測定したところ、各細胞におけるPIMT活性とPIMT発現量の間に相関が得られた。従って、本活性測定系を用いることにより、細胞レベルでのPIMT活性が測定可能であることが確認された。そこで現在は、細胞に様々な刺激を与えた後に回収し、本活性測定系で活性を測定することにより、どのような刺激によりPIMT活性が変動するか解析中である。また別に、ヒト染色体DNAよりPIMTのプロモーター領域をクローニングし、ルシフェラーゼレポーター遺伝子に組込むことにより、PIMTプロモーターの活性測定系の確立も試みている。
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