| 研究課題/領域番号 |
18590114
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
創薬化学
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| 研究機関 | 九州保健福祉大学 |
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研究代表者 |
定金 豊 九州保健福祉大学, 薬学部, 講師 (60293304)
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| 研究分担者 |
川原 正博 九州保健福祉大学, 薬学部, 教授 (40224828)
木葉 敬子 九州保健福祉大学, 薬学部, 助手 (00369175)
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| 研究期間 (年度) |
2006 – 2007
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| キーワード | 光反応 / ジアジリン / 抗体提示ファージ / アミロイド / プロテオーム / パニング / スクリーニング / ペプチド多量化 |
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| 研究概要 |
申請者らは、従来の方法に比べ1000倍以上の選択効率をもつ「フォトパニング法」を開発し、医療抗体産業のインフラとして利用するための基礎技術を開発するために本研究を行った。抗ペプチド抗体産生細胞から得た抗体遺伝子を、抗体を提示するファージとして最も一般的に使用されている繊維状ファージM13に挿入し、抗体提示ファージを製作した。これまでのフォトパニング法はT7ファージライブラリーをターゲットに開発されていたので、抗体を提示するファージ(繊維状M13ファージ)ライブラリーに適応したフォトパニング法を確立した。新しい光反応性パニング素子の開発では成功出来なかったものの、アビジン磁気ビーズを用いたフォトパニング法の開発に成功した。光反応性ペプチドのN末端をビオチン化し、これをリガンドとして溶液中で抗体提示ファージと結合させ、アビジン磁気ビーズで回収、適切な界面活性剤で洗浄することにより、従来法よりも高い効率で目的のファージを回収できることに成功した。
プリオンタンパク質のあるペプチド断片において、ラット海馬初代培養細胞の成長を抑制し、神経細胞死を引き起こした。さらに、アルツハイマーβアミロイドペプチド断片において、N末端のペプチド断片の切り出し、および構造変化が起こるという重大発見に焦点を合わせ、抗体提示ファージを製作した。これまでの研究で、アミロイドペプチドの部分構造の変化がペプチドの多量化速度に影響を及ぼすことが明らかになっているためである。抗体を得るために、N末端が構造変化したペプチドを合成し、マウスに免疫した。5回免疫後、抗血清を得てELISAを行った結果、構造変化を特異的に認識する抗体の力価の上昇を確認した。現在、フォトパニング法で提示ファージ抗体を分離している。
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