| 研究課題/領域番号 |
18590163
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 国立医薬品食品衛生研究所 |
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研究代表者 |
川西 徹 国立医薬品食品衛生研究所, 薬品部, 部長 (40124383)
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| 研究分担者 |
石井 明子 (渡部 明子) 国立医薬品食品衛生研究所, 生物薬品部, 室長 (50291117)
鈴木 琢雄 国立医薬品食品衛生研究所, 生物薬品部, 研究員 (10415466)
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| キーワード | Fcドメイン / タンバク質 / 医薬品 / 体内動態 / 受容体 |
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| 研究概要 |
【目的】Fcドメイン含有タンパク質の血中濃度の維持において主要な役割を果たすと考えられているFc受容体FcRnの発現および機能の制御機構を明らかにすること目的に、(1)FcRn発現量の変動に関する検討、(2)Fcドメイン含有タンパク質のFcRnを介したリサイクル効率測定系確立のための予備検討、を行った。
【方法】(1)FcRnの細胞外部分に対するペプチド抗体を作製し、TNFα、IL-1、TPAなどで刺激した細胞(HUVEC)におけるFcRnの発現をウエスタンブロットにより検出した。(2)モデルタンパタ質としてヒト・マウスキメラ型抗TNFα抗体を用い、抗体が細胞に取り込まれた後にFcRnを介して培地中に放出(リサイクル)される量を測定するためのELISA系構築の検討を行った。
【結果と考察】(1)ヒトFcRnの5'非翻訳領域には、AP-1、Sp-1、CREBなどの転写因子結合配列があるため、炎症性サイトカインやホルボールエステルによる発現変動の可能性が考えられたが、これまでのところ変動は観察されていない。(2)Sulfo-HNS-Biotin試薬を用いてビオチン化した抗TNFα抗体をNeutrAvidinを固定したプレートにアプライし、結合した抗体の検出用試薬としてHRP標識抗ヒトFc抗体を用いたとき、1〜100ng/ml(0.1〜10ng/well)のビオチン化抗TNFα抗体の検出が可能であった。抗TNFα抗体希釈液にIgGを除去した血清を1〜10%添加した場合でも同様に検出が可能であったことから、培養上清を用いた場合にも本検出系が適用できると考えられた。
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