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BAC(bacterial artificial chromosome)システムは、EBウイルスゲノムDNAを大腸菌内で迅速かつ確実に改変できる系として有用である。われわれはバーキットリンパ腫由来Akata細胞のEBウイルスゲノムのBACクローンを用いて組換えEBウイルスを効率よく産生するためのパッケージングシステムの樹立を目指して研究を行った。使用するパッケージング細胞として、ヘルパーウイルスゲノムを有する(1)P3HR-1細胞(ヒトバーキットリンパ腫細胞)、および(2)B95-8細胞とその派生株(マーモセットリンパ球へのEBウイルス感染で樹立されたリンパ芽球様細胞株)を用いて実験を行ったが、いずれの場合においても、組換えEBライルスの産生時におけるヘルパーウイルスDNAとBACクローンDNAの間の組換えが避けられないことが判明した。以上より、これらの細胞をパッケージング細胞として用いた系では野生型ウイルスの混在のない純粋な組換えウイルスを得ることは困難との結論に達した。
そこでB95-8株EBウイルスゲノム全長を含むBACクローンを新たに取得し、これを用いてヘルパーウイルスの助けを借りない実験系を構築する方向へと方針転換した。新たに取得したBACクローンDNAを、組換えEBウイルス産生細胞としての報告があるヒト293細胞に導入し、薬剤選択を行ったところ、組換えウイルス産生細胞を効率よく樹立可能であった。得られた組換えウイルスのBリンパ球不死化効率、および外来遺伝子の発現効率は、従来報告されている293細胞由来の組換えEBウイルスと比較して、いずれも優れていることが判明した。
以上の結果より、今回新たに取得したB95-8株EBウイルスゲノムのBACクローンと293細胞の組み合わせは、野生型ウイルスの混在のない、純粋な高力価組換えEBウイルス産生において有用であると考えられた。
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