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今年度は主に作製したPRAT4Aノックアウトマウスの解析を行い、以下のような知見が得られた。
1.作製したPRAT4Aノックアウトマウスを用いた機能解析
1)PRAT4Aノックアウトマウス抽出細胞での解析
ノックアウトマウスより抽出・誘導した細胞ではTLR41MD-2のみならずTLR1、TLR2などの発現が低下していた。TLRリガンド刺激によるサイトカイン産生およびB細胞増殖では、これら細胞表面TLRのみならず、TLR3以外の細胞内TLRの応答も消失していた。PRAT4AがTLR4のみならずTLR9にも会合しこれらTLRのERからのtraffickingに必要であることがわかった。さらに細胞によってまたTLRの種類によってPRAT4Aの影響が異なることが分かった。
2)ノックアウトマウス個体レベルでの解析
エンドトキシンショックではワイルドまたはヘテロマウスで全例死んでしまう量でもPRA4AKOキメラマウスはすべて生存したことから、その発症にPRAT4A経路が必要であることがわかった。
さらにPRAT4Aに対するモノクローナル抗体を用いた治療応用の可能性を検討中である。
3)Sa15-21による活性化シグナルについてPRAT4関与の検討
PRAT4Aノックアウトマウスが栄養不良で早期に死亡するため抗TLR4/MD-2抗体(Sa15-21)による肝臓アポトーシス抑制効果の検討はできていない。PRAT4Aノックダウン細胞で15-21によるサイトカイン産生を検討したが特にワイルドタイプとの違いは見られなかった。
2.PRAT4とホモロジーのある分子の検索
見つかった候補分子のうちひとつはノックアウトマウス作製に成功し、また別のひとつはトランスジェニックマウスの作製に成功している。現在解析中である。
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