研究課題
基盤研究(C)
本研究では、2次元液体クロマトグラフィー-MALDI-TOF型質量分析(以下2D-LC-MALDI-TOF/MSと略)を用いたディファレンシャル・プロテオーム解析法と遺伝子発現解析によって、がんなどの疾患におけるタンパク質シグナルカスケードの解析を行う。本研究では、血清などの生体試料の前処理とクロマトグラフィーの分画条件、および新たに開発したデータ処理技術をもとに96穴または384穴フォーマットとしてロボットによる操作によりオートメーション化を達成し、1サンプルを1,140分画に分けたのち試料中の全ペプチドをMALDI-TOF-MSで検出できるシステムを構築した。さらにペチド(分子量1万以下)に着目してサンプルの前処理技術を開発することによって定量プロテオミクス解析を行った。本研究では、複数の分画・サンプルにまたがった質量分析結果を一元的に比較示し、さらに複数サンプル間の発現量の差を検出する解析ツールの研究とタンパク質のMS/MSによる同定効率の向上をなど自動化と定量MS分析技術の研究を行った。また、タンパク質解析の比実験としてマイクロアレイにがんの遺伝子発現頻度解析と行いデータベース化を行い、これらの結果を合わせて細胞内シグナル因子の探索を行った。その結果、がんなどを含むヒトの疾患発生や進展に関連するタンパク質とそのカスケードの一部が明らかになるとともに、診断・治療に役立つ情報を得ることができた。
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