小腸粘膜上皮細胞の分化誘導における転写因子Math1とCdx2の関係

2006 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18590697
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 武藤 弘行 自治医科大学, 医学部, 講師 (50322392)
• キーワード: Cdx2 / Math1 / トランスジェニックマウス / 腸上皮化生 / luciferase assay / EMSA / RT-PCR / Western blot

研究概要

正常胃粘膜にはMath1が発現していないが、Cdx2トランスジェニックマウスの腸上皮化生粘膜にMath1が発現していることを確認した。Math1の誘導が転写レベルで起きていることを確認するためCdx2トランスジェニックマウスの胃粘膜を剥離してRNAを抽出しRT-PCRとNorthern blotにてMathlの発現を確認した。同時にWestern blotにより蛋白レベルでの発現の確認した。次に小腸陰窩由来の未分化細胞であるIEC-6 cellを用いてCdx2の発現ベクターのtransfectionによりMath1が誘導されることをRT-PCR、Northernblot、Western blotにてCdx2によるMath1の誘導を確認した。さらにMath1のプロモーター領域をマウスのゲノムを鋳型としてPCRによりとり、luciferase assayを用いて転写活性を検討した。Deletionmutantを作成してCdx2binding siteを決め、binding siteにmutationを導入することによりMathlプロモーター領域のCdx2の結合部位を決定した。Electrophoretic Mobility Shit Assay(EMSA)によりこの結合領域を確認した。以上よりMathlがCdx2により誘導されることをin vitroおよび遺伝子レベルで解明した。

研究成果

• [雑誌論文] A close relationaship between intestinal metaplasia and Cdx2 expression in human gallbladders with cholelithiasis. (2007)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto H, Mutoh H, Ido K, Satoh K, Hayakawa H, Sugano K
  • 雑誌名: Hum Pathol 38 ページ: 66-71
• [雑誌論文] The intestine-specific homeobx gene Cdx2 induces expression of the basic helix-loop-helix transcription factor Math 1. (2006)
  • 著者名/発表者名: Mutoh H, Sakamoto H, Hayakawa H, Arao Y, Satoh K, Nokubi M, Sugano K
  • 雑誌名: Differentiation 74 ページ: 313-321
• [雑誌論文] Differential gene expression between flat adenoma and normal mucasa in the colon using microarray. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kita H, Hikichi Y, Hikami K, Tsuneyama K, Cui Z-G, Osawa H, Ohnishi H, Mutoh H, Hoshino H, Bowlus CL, Yamamoto H, Sugano K
  • 雑誌名: J Gastroenterol 41 ページ: 1053-1063
• [雑誌論文] Helicobacter pylori eradication induces marked increase in H^+/K^+-adenosine triphosphatase expression without altcring parictal cell number in human gastric (2006)
  • 著者名/発表者名: Osawa H, Kita H, Ohnishi H, Hoshino H, Mutoh H, Ishino Y, Watanabe E, Satoh K, Sugano K
  • 雑誌名: Gut 55 ページ: 152-157