| 研究概要 |
1.気道平滑筋細胞の増殖反応:ヒト気道平滑筋培養細胞をufCB粒子の存在下で72時間培養を行い,[^3H]-thymidineと[^3H]-leucineの細胞内取り込みが用量依存的に増加した.
2.気道平滑筋細胞におけるEGFR活性化の関与:またufCB粒子の曝露はリン酸化EGFR(活性型P-EGFR)の発現を誘導し,その効果および蛋白質・DNA合成はEGFRチロシンリン酸化阻害薬(AG1478とBIBX1382)による抑制を受けたが,血小板由来成長因子受容体(PDGFR)阻害薬は無効であった.
3.細胞増殖におけるRas-ERKカスケード活性化の役割:ufCB粒子刺激による気道平滑筋細胞の増殖におけるRas-ERKカスケードの役割を検討したところ,Dominant-negative Ras mutantであるAdRasY57をトランスフェクトした系では蛋白質・DNA合成が阻止された.また,MEK(MAP kinase kinase)阻害薬やERKカスケード阻害薬も同様の抑制効果を示した.
4.気道平滑筋細胞ERK活性の測定:ERKの活性化は免疫組織化学とWestern blotにて評価を行い,またERKの直接的な評価として,平滑筋細胞の遠心上清中のERK活性をアッセイキットにより測定した.その結果,ufCB粒子による刺激はERKのリン酸化を誘導し,ERK活性の上昇をもたらした.
5.Grb2およびShcとEGFRとのアセンブリー:EGFRとERK cascadeの関連を調べるために,EGFRおよびShcとGST-Grb2 fusionのassociationを検討した.その結果,超微粒子曝露によりEGFR,またShcの2つのisoformとのassociationが増加し,その効果はHB-EGFブロッカーである[Glu^<52>]Diphtheria toxinによって強く抑制された.
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