AAVベクターを用いた糖尿病性神経障害に対する新規遺伝子治療

2007 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 18590934
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 神経内科学
• 研究機関: 滋賀医科大学
• 研究代表者: 安田 斎 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (80135467)
• 研究分担者: 小島 秀人 滋賀医科大学, 医学部, 准教授 (00225434)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2007
• キーワード: 糖尿病性神経障害 / 後根神経節 / ファージベクター / RT-PCR / cDNA / エリスロポエチン / 神経成長因子

研究概要

【研究目的】糖尿病性神経障害の新しい治療法として、神経細胞内で長期間安定した遺伝子発現を可能とする脊髄後根神経節(DRG)ニューロン特異的なファージベクターの作成を試みる。【研究実施計画】(1)New England Biolabs社製Ph. D. C7C Phage Display Peptide Libraryを用いて、DRGに特異的に接着する7桁ペプチドを採取し、この配列をphage vector pIIIサイトに付加し、DRG特異的に接着できるベクターを作製する。(2)マウスよりEPOおよびNGFなど糖尿病性神経障害に有効とされる成長因子のRNAを抽出し、RT-PCRによりcDNAを作製し、これにプロモータならびにpolyAを接着して発現遺伝子システムを作製し、ファージベクターに組み込む。STZ糖尿病マウスを用いて、糖尿病性神経障害対する治療効果を検討する。また、同時に、神経障害性のサイトカインであるTNFαの発現抑制をねらって、RNAiを用いたノックダウンも試みる。【研究成果(内容、意義、重要性)】(1)バイオパンニングにより、87種類のDRGニューロンに親和性を有するペプチド配列を抽出した。この配列のうち3種類を用いて、DRGニューロンに対する特異性をin vitroならびにin vivoで検討し、有用性を明らかにした。次に、ファージベクターの作製を行い、緑色蛍光色素(GFP)を発現する遺伝子配列をこれらのベクターに組み込み、in vivoにて、遺伝子発現の効率を観察している(現在継続中)。(2)EPO、NGFならびにTNFαのRNAiを用いて、発現システムを作り上げた。完成までには今しばらくの努力が必要であるが、これらの結果は病的神経細胞を標的とする遺伝子治療を計画することが可能であることを意味しており、現在開発を進めている。

研究成果

• [雑誌論文] Isolation of specific peptides that home to dorsal root ganglion neurons in mice (2008)
  • 著者名/発表者名: Oi J, Terashima T, Kojima H, Fujimia M, Maeda K, Arai R, Chan L, Yasuda H, Kashiwagi A, Kimura H
  • 雑誌名: Neuroscience Letters 434 ページ: 266-272
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Isolation of specific peptides that home to dorsal root ganglion neurons in mice. (2008)
  • 著者名/発表者名: Oi, J., Terashima, T., Kojima, H.,Fujimia, M., Maeda, K., Arai, R., Chan. L., Yasud,. H., Kashiwagi, A., Kimura, H
  • 雑誌名: Neuroscience Letters 434-3 ページ: 266-272
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より