| 研究課題/領域番号 |
18590977
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
塚本 和久 東京大学, 医学部附属病院, 助手 (20251233)
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| 研究分担者 |
原 眞純 東京大学, 医学部附属病院, 助手 (70420213)
磯尾 直之 東京大学, 大学院医学系研究科, 助手 (80420214)
渡辺 卓郎 東京大学, 医学部附属病院, 助手 (20376437)
石坂 信和 東京大学, 医学部附属病院, 助手 (20270879)
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| キーワード | 動脈硬化 / 炎症 / 植物ステロール / ステロリン |
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| 研究概要 |
1)ABCG5およびABCG8のcDNAクローニング
ヒト肝臓cDNAライブラリーから、PCR法にてABCG5およびABCG8のクローニングを行った。その結果、ABCG8に関しては比較的容易にcDNAのクローニングに成功したが、ABCG5に関しては5'末端近位部のPCRにて、目的の長さのPCR産物ができなかったため難渋した。様々な検討を加えた結果、肝臓においてはABCG5の5'末端近位部は小腸とは異なるスプライシングが行われていること、小腸で優位なsplicingは存在しないこと、を確認された。また、ABCG5の3'末端近位部においても、alternative splicingが存在していることを確認した。ABCG5 cDNAに関しては、これら4種類の型のcDNAを作成を現在終了する段階となっている。
2)アポE/ABCG5/8欠損マウスの作成
アポタンパクE欠損マウスとABCG5/8欠損マウスを入手後交配させ、ダブル欠損マウスを確立した。しかし、動物実験舎にてボイラー爆発という事故が生じたため、一時的にコロニー保持に努めざるを得ない状況であった。現在、コロニーを増やし、動脈硬化および脂質レベルの検討を開始している。
3)マクロファージにおけるABCG5/8発現およびサイトカイン分泌の検討
正常ヒト末梢血由来マクロファージ、正常マウス腹腔マクロファージ、J774A1マクロファージ、およびRAW264.7マクロファージにて、ABCG5およびABCG8のcDNAの検討を行った結果、ABCG8に関しては発現が認められなかったが、ABCG5に関してはヒトマクロファージにおいてPCRにて検出された。また、植物ステロールをヒトマクロファージに負荷したが、現在のところIL-6に関しての相違は認めなかった。今後、条件を振ることにより更に検討を行う。
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