甲状腺ホルモン受容体βに特異的に結合するタンパクの機能解析

2007 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 18591018
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 内分泌学
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 加納 安彦 名古屋大学, 環境医学研究所, 助教 (50252292)
• 研究分担者: 林 良敬 名古屋大学, 環境医学研究所, 准教授 (80420363) ; 高岸 芳子 名古屋大学, 環境医学研究所, 助教 (50024659) ; 村田 善晴 名古屋大学, 環境医学研究所, 教授 (80174308)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2007
• キーワード: 甲状腺ホルモン不応症 / 甲状腺ホルモン受容体 / コアクチベーター / 酵母Two-Hybridシステム / cDNA / クローニング

研究概要

甲状腺ホルモン不応症には2種類の甲状腺ホルモン受容体(TR)になんらの異常を持たない症例がある.その原因として、甲状腺ホルモン受容体βに特異的に結合するコアクチベーターが存在し、何らかの異常を持っているのではないかと想定した.そこで、酵母Two-Hybridシステムにより、ヒト肝cDNAライブラリーよりTRβと特異的に結合するタンパクのcDNAのクローニングを試み、タンパクの機能がいまだ不明な2種類のcDNAを同定した.
1.クローンNo.60には3種類のmRNAが存在し、すべての全長cDNAをクローニングした.決定した塩基配列とアミノ酸配列より、コードされるタンパクが核内の存在することが推測された.
2.推測されたアミノ酸配列には、既に報告のある核内タンパクと高い相同性があることが明らかになった.
3.In vitroでのpull-downアッセイを行うため、TRβをGST融合タンパクとして、クローン60タンパクをHis-tag融合タンパクとして、いずれも大腸菌で発現させた.
4.融合タンパクを相互作用させ、免疫沈降反応後SDS-PAGE/ウェスタンブロット法によって両タンパクの結合を検討した結果、確かにクローン60タンパクがTRβと結合していることを確認した.
5.クローン93タンパクは、His-tagタンパクとしての高発現させることができず、in vitroでの相互作用は確認できなかった.
6.引き続き、クローン60タンパクの機能を解析するための実験を行っている.

研究成果

• [雑誌論文] Insertion on an intracistemal A particle retrotransposon element in plasma membrane calcium ATPase 2 gene attenuates its expression and produces an ataxic phenotype in joggle mutant mice (2008)
  • 著者名/発表者名: Sun, XY., Hayashi, Y., Kanou, Y., Takagishi, Y., Murata, Y., et. al.
  • 雑誌名: Gene 411 ページ: 94-102
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Thyroglobulin gene mutations producing defective intracellular transport of thyroglobulin are associated with increased thyroidal type 2 iodothyronine (2007)
  • 著者名/発表者名: Kanou, Y., Murata, Y., 他11名
  • 雑誌名: Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 92 ページ: 1451-1457
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mapping of jog locus to the region between D6Mit104 and D6Mit336 on mouse chromosome 6. (2007)
  • 著者名/発表者名: Sun, XY., Kanou, Y., Takagishi, Y., Hayashi, Y.,
  • 雑誌名: Experimental Animal 56 ページ: 389-392
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Insertion of an intracisternal A particle retrotransposon element in plasma membrane calcium ATPase 2 gene attenuates its ecpression and produces an (2007)
  • 著者名/発表者名: Sun, XY., Hayashi, Y., Kanou, Y., Takagishi, Y., Murata, Y.,
  • 雑誌名: Gene 411 ページ: 94-102
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Thyroglobulin gene mutations producing defective intracellular transport of thyroglobulin are associated with increased thyroidal type 2 iodothyronine deiodinase activity (2007)
  • 著者名/発表者名: Kanou, Y., Murata, Y., et. al.
  • 雑誌名: Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 92 ページ: 1451-1457
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Mapping of jog locus to the region between D6Mit104 and D6Mit336 on mouse chromosome 6 (2007)
  • 著者名/発表者名: Sun, XY., Kanou, Y., Takagishi, Y., Hayashi, Y., Murata, Y., et. al.
  • 雑誌名: Experimental Animal 56 ページ: 389-392
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] 「研究成果報告書概要(和文)」より (2006)
  • 著者名/発表者名: HISHINUMA Akira, 4名略, MURATA Yoshiharu, 他14名
  • 雑誌名: Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 91 ページ: 3100-3104
  • 査読あり
• [雑誌論文] Unique regulation of thyroid hormone metabolism during fasting in the house musk shrew(Suncus murinus, Insectivora: Soricidae). (2006)
  • 著者名/発表者名: TAKEUCHI Yoko, SUZUKI Daisuke, 6名略, MURATA
  • 雑誌名: General and Comparative Endocrinology 146 ページ: 236-241
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Haplotype analysis reveals fouder effects of thyroglobulin gene mutation C1058R and C1977S in Japan (2006)
  • 著者名/発表者名: Hishimuma, A., Murata, Y., et. al.
  • 雑誌名: Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 91 ページ: 3100-3104
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Unique regulation of thyroid hormone metabolism during fasting in the house musk shrew (Suncus murinus, Insectivora : Soricidae) (2006)
  • 著者名/発表者名: Takeuchi, Y., Suzuki, D., Murata, Y., et. al.
  • 雑誌名: General and Comparative Endocrinology 146 ページ: 236-241
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] The expression and role of thyroid hormone responsive gene, ZAKI-4, during brain development (2008)
  • 著者名/発表者名: Kanou, Y., Hayasaka, S., Sun, XY., Tang, YP., Takagishi, Y., Hayashi, Y., Murata, Y
  • 学会等名: The Japan Endocrine Society
  • 発表場所: Tokyo
  • 年月日: 2008-06-14
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] 甲状腺ホルモン応答性遺伝子ZAKI-4の脳発達過程における発現と高次機能における役割 (2007)
  • 著者名/発表者名: 加納安彦、高岸芳子、林良敬、村田善晴、他3名
  • 学会等名: 第80回日本内分泌学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2007-06-14
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より