| 研究課題/領域番号 |
18591032
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
宮田 篤郎 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (60183969)
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| 研究分担者 |
井上 和彦 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教 (30363641)
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| キーワード | 下垂体 / アデニル酸シクラーゼ / 神経ペプチド / 遺伝子発現 / 精巣 / 転写因子 / 生殖系細胞 |
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| 研究概要 |
多機能神経ペプチドPituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP)は、中枢神経系に分布する他、精巣にも比較的高濃度に存在しており、PACAPおよびそのレセプター発現が精子形成のステージにより周期的に変化する事から、生殖細胞の分裂増殖、分化あるいは生存への関与が示唆されている。我々は、ヒト精巣におけるPACAP遺伝子発現調節機構を解明する目的で、ヒトPACAP遺伝子において、精巣特異的PACAPプロモーター領域の同定と解析を行った。
前年度にクローニングしたヒトPACAP遺伝子の精巣特異的エクソン(hTE)の上流1kBにおける転写調節領域の様々な長さの欠失変異体を作成し、そのプロモーター活性を、非生殖細胞株(Swiss-3T3とPC12)と生殖細胞株(F9とCHO)において、ルシフェラーゼアッセイにより比較評価した。その結果、約80bpの領域において、非生殖系細胞株であるSwiss-3T3とPC12では見られなかったが、生殖系細胞株であるF9とCHOに、特に精巣由来細胞であるF9においては顕著な転写活性が観察された。この領域の3カ所のプローブを合成し、F9及びマウス初代精巣細胞の核抽出蛋白を用いてゲルシフトアッセイを行ったところ、複数の結合蛋白の存在が確認された。この領域にはC/EBPとAML-la配列が存在するが、これら単独ではプロモーター活性を示すという報告がないことから、PACAP遺伝子の精巣特異的発現調節に未知の転写因子の関与が示唆された。
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