| 研究課題/領域番号 |
18591048
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
古川 達雄 新潟大学, 医歯学総合病院, 助教授 (00272849)
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| 研究分担者 |
高橋 益廣 新潟大学, 医歯学系, 教授 (90179531)
矢野 敏雄 新潟大学, 医歯学総合病院, 医員 (00419326)
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| キーワード | SEREX / 骨髄不全 / Zinc Finger motif / ZNF292 |
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| 研究概要 |
1.造血不全症例の細胞障害性T細胞の標的抗原を明らかにする目的で、SEREX法を用いて症例血清中に検出される、骨髄細胞発現蛋白に対する自己抗体を調べた結果、clone 56を同定。clone 56はZNF292遺伝子にコードされているZinc fingerモチーフを有するDNA結合蛋白の一部であった。この遺伝子発現の組織分布は、Northern Blot解析により胎盤、睾丸、前立腺、甲状腺で強い発現が認められた。
2.一方骨髄細胞ではNorthern Blotでは検出されず、RT-PCRで発現が確認された。また末梢血単核球分画ではNorthern Blotでも弱い発現が認められ、Magnet beadsを用いて分画したリンパ球細胞について定性RT-PCRを施行したところ、CD8>CD19>CD4=CD56と各分画におけるPCR productのバンド濃度に相違が認められ、lineageによる発現量の相違が示唆された。
3.Clone 56を含む遺伝子全長の同定について
我々が同定したclone 56が確実にZNF292の一部であることを証明するために、clone 56の配列部分(約9.5kbのintronless exon内)から上流にRT-PCRによるwalkingと塩基配列を決定、どのexonsが利用されているかを確認した。その結果ZNF292として登録されているmRNA配列の全長と連結することが確認された。
4.ZNF292蛋白からの抗原ペプチド同定の試み
一方ZNF292蛋白配列由来のCTL活性を有するペプチドを検索するために、まず日本人で最も頻度が高いHLA24に結合する可能性があるペプチドを合成して、HLA A2402遺伝子を導入したC1R-2402細胞を利用したaffinity assayを施行した。その結果affinityが2倍程度に増強が認められる配列が2箇所検出された。
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