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全前脳症(Holoprosencephaly;HPE)の亜型である middle interhemispheric variant(別名syntelencephaly)で6番染色体長腕にEYA4遺伝子を含む約10 Mb欠失を認めた。高密度オリゴヌクレオチドアレイから得られた情報の基づき、PCR法を用いて切断点の配列を決定した。その結果、切断点には5bpのオーバーラップがあることがわかった。また遠位の切断点はEYA4のイントロン2内にあり、EYA4のプロモーター領域とエクソン1と2が欠損していることがわかった。一方、近位の切断点付近には遺伝子が存在しないため、キメラRNAは作られないこともわかった。そこで万EYA4の機能について解析を行った。前年度ルシフェラーゼアッセイでEYA4はHPEの責任遺伝子の一つであるSIX3と協調的にはたらいてソニックヘッジホッグ(SHH)シグナル伝達を亢進していることを示したが、本年度GFP(緑色蛍光タンパク)標識のEYA4とDs-Red(赤色蛍光タンパク)標識のSIX3を単独で、あるいは共に高発現させて細胞内分布を見た。EYA4タンパクは本来細胞質にも核内にも分布するが、核タンパク質であるSIX3を高発現させると核内にリクルートされることを共焦点レーザー顕微鏡で示され、両者が結合することが示唆された。また共免疫沈降の実験からもこのデータが支持された。これらのことから、EYA4とSIX3は互いに結合することでSHHシグナル伝達を亢進させていることがわかったが、この作用が直接的なものであるというデータは得られていないため、何らかの分子を介する間接的なものである可能性があり、そのメカニズムの解明が今度の課題である。
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