| 研究課題/領域番号 |
18591190
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 高知大学 |
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研究代表者 |
脇口 宏 高知大学, 医学部, 教授 (10116519)
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| 研究分担者 |
前田 明彦 高知大学, 医学部附属病院, 講師 (50335931)
黒田 正幸 高知大学, 医学部, 助手 (00253005)
今井 章介 高知大学, 医学部, 教授 (60232592)
藤枝 幹也 高知大学, 医学部, 助教授 (60209020)
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| キーワード | ウイルス / 感染症 / 遺伝子治療 |
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| 研究概要 |
慢性活動性EBV感染症、その他のEBV関連難治性疾患の診断・活動性モニタリングについてはほぼ確立されているが、治療はまだ確立されたものがない。EBVNA1は全てのEBV感染細胞に表出される潜伏抗原で、EBV増幅に必須の遺伝子である。当研究グループは独自にEBV episomeを駆逐する分子dnEBNA1を作成し、EBV陽性B細胞株からEBVゲノムの放逐に成功した。その結果、EBV陽性細胞株は悪性度を喪失すること、EBVゲノム放逐機序がwtEBNA1との競合に加え、wtEBNA1転写プロモーター(Qp)EBNA1合成を阻害することを明らかにした。
本年度はdnEBNA1によるEBV感染T細胞、NK細胞株からのEBVゲノム脱落の過程を経時的に追跡し、EBV感染B細胞株と同様に増殖力を低下させるか否かを検討した。また、EBV遺伝子ノックダウンによる治療法を開発する準備段階として、EBV特異的small hairpin(sh)RNAの合成を試みた。
1)EBV感染NK細胞株にdnEBNA1を導入したところ、導入翌日のEBVゲノム量はMockウイルスと同程度であったが、3日後には約40%に、6日後には約20%に減少した。その後、9日まで観察したが、それ以上の減少は見られなかった。EBV感染T細胞株については、dnEBNA1導入3日後にMockウイルスの約45%に、5日後には約40%に減少した。
2)dnEBNA1導入後の細胞増殖はEBV感染T細胞2株、NK細胞1株のいずれについても、導入dnEBNA1量依存性に細胞増殖が抑制された。増殖抑制の程度は、T細胞株よりもNK細胞株の方が強い傾向が見られた。
3)軟寒天培地でのコロニー形成(悪性度の指標)はT細胞株、NK細胞株ともにdnEBNA1導入細胞株ではコロニー形成が観察されず、EBVゲノム喪失によってT、NK細胞株の悪性形質も喪失されることが明らかになった。
以上の成績から、EBV関連腫瘍の治療についてB細胞性リンパ腫だけでなく、T、NK細胞性リンパ腫についても有効な遺伝子治療用分子になる可能性が示された。
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