| 研究概要 |
EBウイルスが感染したNK/T細胞(EBV-NK/T)増殖症では,しばしば蚊刺に対する激しい局所反応と,発熱・リンパ節腫張・肝脾腫などの全身反応を呈する「蚊アレルギー」と呼ばれる症状が見られることが知られている。我々は,これまでに蚊アレルギーを呈したEBV-NK/T増殖症患者について,ヒトスジシマカ蚊唾液腺抗原刺激がCD4(+)T細胞を活性化し,この活性化CD4(+)T細胞が,EBV-NK/Tに作用し,ウイルス発癌遺伝子LMP1の発現を増強してEBV-NK/Tの増殖を亢進させることをみいだした。今回の研究では,EBV-NK/Tの腫瘍化に重要な役割を果たしていると考えられるLMP1のmRNAを標的とするsiRNAを作製し,この分子をEBV-NK/Tに導入することにより,LMP1を阻害し,この分子の機能解析を進めるとともに,LMP1を標的分子とする治療法の開発をめざすことを目的とした。まずsiRNA導入用試薬としてOligofectamine(Invitrogen)を用い,蛍光標識されたsiRNA(FAM Labeled Negative Control #1 siRNA)のリンパ球へのトランスフェクションを種々の条件で試み,細胞内への取り込みをモニタリングして,至適なトランスフェクション条件を決定した。次に,LMP1遺伝子を抑制するためのsiRNAの候補を2種類設計し,これらのsiRNAを蚊アレルギー患者血由来EBV-NK/Tの長期培養細胞へ,我々が決定した至適条件下で導入した。さらにこのsiRNA導入細胞をヒトスジシマカ唾液腺抗原で刺激したCD4(+)T細胞と混合培養後,LMP1 mRNAの発現をRT-PCR法により検討した。その結果,作製したsiRNAはLMP1mRNAの発現を効率よく阻害することが判明した。
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