| 研究概要 |
目的
より効率のよい放射線がん治療を行うためには、放射線照射後に細胞を生存に導くシグナル伝達系を阻害することが有効と考えられる。当該研究の初年度にアポトーシス抑制あるいはDNA修復にかかわる遺伝子(XIAP,NBS1)の発現をsmall interference RNA(siRNA)によって特異的に阻害することにより、がん細胞を死に導き放射線感受性が高められるか検討した。次年度には、XIAP-siRNAによるXIAP遺伝子の発現阻害によるアポトーシス増強についてさらに詳しく調べた。さらに、ヌードマウス担がん系でsiRNAによる腫瘍増殖抑制効果を調べるため、ヌードマウスに移植するためのNBS1-siRNA発現プラスミド導入細胞を作製し、その細胞の放射線感受性を調べた。
方法
p53欠損ヒト非小細胞肺がんH1299細胞に正常型あるいは変異型p53遺伝子を導入した細胞(H1299/wtp53、H1299/mp53)を用いた。ウエスタンブロッド法と免疫蛍光染色法でXIAP,caspase-3あるいはPARP蛋白質の量的変化と細胞内局在を検討した。ヘキスト染色法でアポトーシスの出現頻度を調べた。さらに、NBS1標的siRNA発現DNAカセットを組込んだプラスミドをH1299/wtp53、H1299/mp53細胞に導入し、放射線感受性をコロニー形成法で調べた。H1299/wtp53あるいはH1299/mp53細胞をヌードマウス背部皮下に移植した後、背部に形成された腫瘍を5mm四方にミンスし大腿皮下に移植した。
結果
1. XIAP標的siRNA導入により放射線誘導caspase-3活性化とPARP断片化が増強された(Ohnishi et al., Oncol. Rep., 2008)。
2. XIAP標的siRNA導入により放射線誘導アポトーシスが増強された(Ohnishi et al., Oncol. Rep, 2008)。
3. 今回スクリーニングしたNBS1-siRNA発現プラスミド導入細胞では有意な放射線感受性増感は見られなかった。
4. ヌードマウス背部およびに大腿皮下でH1299/wtp53あるいはH1299/mp53腫瘍がp53遺伝子型に依存した速度で増殖した。
成果
XLAP-siRNAを用いてXIAP遺伝子発現を阻害することにより放射線誘導アポトーシスを増強することができた。このアポトーシス増強が放射線増感の一因である可能性を示した。この結果からXIAP-siRNAは放射線増感剤として有用である可能性が示唆された。この成果はOnco1.Rep.,2008に報告した。また、p53遺伝子のみ異なるヒト非小細胞肺がんH1299細胞を用いてsiRNA発現プラスミドによる腫瘍増殖抑制効果については今後さらに検討する必要性が示唆された。
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