| 研究概要 |
1.Thy1(+)gp38(+)細胞を用いた肝前駆細胞の成熟化培養法の確立
マウス胎仔肝臓由来肝幹・前駆細胞はThy1(+)gp38(+)間葉系細胞と共培養することにより,グリコーゲンの産生・蓄積、肝臓発生後期マーカーの出現,電子顕微鏡による肝細胞への形態変化が認められたT(+)gp38(+)細胞は肝細胞への成熟化を促進することが示された.この肝細胞成熟化能は接触共培養時にのみ認められ,conditioned mediumでは認められなかった.さらに、成熟化に関わる遺伝子検索の為にマイクロアレイを用いて網羅的解析を施行した。一方、成熟化メカニズムの安定的解析を目指してThy1(+)gp38(+)細胞に不死化遺伝子(SV40 large T antigen)を導入し、細胞株を樹立した。RT-PCRによる発現遺伝子解析やPAS染色、アンモニア除去能を検証し、肝幹・前駆細胞を成熟化させる能力を維持しているクローンを選別した。
2. Thy1(+)gp38(-)細胞を用いた肝前駆細胞の未分化維持培養法の確立
1)未分化維持培養法
肝幹・前駆細胞はThy1(+)gp38(-)細胞との共培養によって,肝発生後期マーカーが発現せず、肝細胞と胆管細胞のマーカーが両者とも発現している割合が増加した。さらにBrdUの陽性率が増加し,肝前駆細胞の増殖活性を維持することも確認されたことから、Thy1(+)gp38(+)細胞が未分化維持機能を有していることが示唆された.
2)Thy1(+)gp38(-)細胞細胞の機能解析
Thy1(+)gp38(-)細胞から得られたconditioned mediumを用いて培養すると,Thy1(+)gp38(+)細胞の肝前駆細胞成熟化促進能が阻害されたことから,Thy1(+)gp38(-)細胞が持っている未分化維持機能は液性因子の中に責任分子が存在することが示唆された。
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