RNAiを用いた軽度低温の脳浮腫抑制効果に果たす水チャンネル機能の解析

2008 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 18591714
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 麻酔・蘇生学
• 研究機関: 名古屋市立大学
• 研究代表者: 藤田 義人 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科上, 講師 (90238593)
• 研究分担者: 浅井 清文 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 教授 (70212462) ; 祖父江 和哉 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 教授 (90264738)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2008
• キーワード: 水チャンネル / 脳浮腫 / RNAi / アクアポリン / 脳低温

研究概要

今後の研究の基礎となるアクアポリン(AQP)Knockdown細胞株の確立を重点に行った。Knockdownが確認されているconstructに加えオリジナルのものを作成した。vectorには、invitrogen社製のBlock-IT Pol II miR RNAi expression vector、pcDNA 6.2-GW/miRを使用した。そのプラスミドを大腸菌にtransformationして、大量培養し、Quiagen社のキットを用いて、目的となるconstructを含むプラスミドを大量に、無菌的に精製した。RNAiの効果を確認するが効果が弱く、原因の追求のためGFPをvectorに挿入した。そのGFPつきのvectorの挿入で、視覚的におおざっぱにいって20%ぐらいのtranfection効率があることを確認した。ただRNAi効果をえる効率は、まだ10%程度にとどまった。transfection効率をあげるためレンチウイルスを使用したvectorの作製を進めると同時に、現在作成してあるGFPつきvectorを用い。実際の低温における脳浮腫効果の解明を始めている。また、同時に疾患の重傷度の指標として注目している乳酸値について、乳酸負荷でのアストロサイトにおける水チャンネルの発現の変化についても解析し、論文発表した。

研究成果

• [雑誌論文] Before-after study of a restricted fluid infusion strategy for management of donor hepatectomy for living donor liver transplantation (2009)
  • 著者名/発表者名: Yoshihito Fujita, Akinori Takeuchi, Takeshi Sugiura, Tomonori Hattori, Nobuko Sasano, Yuichiro Mizuochi, Kazuya Sobue
  • 雑誌名: J. Anesth (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lactic acid increases aquaporin 4 expression on the cell membrane of cultured rat astrocytes (2008)
  • 著者名/発表者名: Morishima T, Aoyama M, Iida Y, Yamamoto N, Hirate H, Arima H, Fujita Y, Sasano H, Tsuda T, Katsuya H, Asai K, Sobue K.
  • 雑誌名: Neurosci Res. 61(1) ページ: 18-26
  • 査読あり
• [雑誌論文] Ca2+-dependent activator protein for secretion 1 is critical for constitutive and regulated exocytosis but not for loading of transmitters into dense core vesicles (2007)
  • 著者名/発表者名: Fujita Yoshihito, Xu A, Xie L, Arunachalam L, Chou TC, Jiang T, Chiew SK, Kourtesis J, Wang L, Gaisano HY, Sugita S.
  • 雑誌名: J Biol Chem 282(29) ページ: 21392-403
  • 査読あり
• [雑誌論文] Munc18-1 Is Critical for Plasma Membrane Localization of Syntaxinl but Not of SNAP-25 in PC12 Cells (2007)
  • 著者名/発表者名: Arunachalam L, Han L, Tassew NG, He Y, Wang L, Xie L, Fujita Y, Kwan E, Davletov B, Monnier PP, Gaisano HY, Sugita S.
  • 雑誌名: Mol Biol Cell 19(2) ページ: 722-734
  • 査読あり
• [雑誌論文] Anesthetic management of a patient with mitochondrial myopathy, encephalopathy, lactic acidosis, and stroke-like episodes(MELAS)during laparotomy (2007)
  • 著者名/発表者名: Nobuko Sasano, Yoshihito Fujita, MinHye So, Kazuya Sobue, Hiroshi Sasano and Hirotada Katsuya
  • 雑誌名: J. Anesth 21 ページ: 72-5
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inadvertent intrathecal cannulation in an infant demonstrated by three-dimensional computed tomography : a rare complication of internal jugular vein catheterization (2006)
  • 著者名/発表者名: Fujita Yoshihito, Sobue K, Hattori T, Takeuchi A, Tsuda T, Katsuya H.
  • 雑誌名: J. Anesthesia 20 ページ: 122-5
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intra-operative monitoring of vagal nerve activity with wire electrodes (2006)
  • 著者名/発表者名: Ito H, Sobue K, So M, Hirate H, Sugiura T, Azami T, Fujita Y, Sasano H, Katsuya H.
  • 雑誌名: Acta Anaesthesiol Scand 50(10) ページ: 1304-5
  • 査読あり
• [雑誌論文] 硬膜外麻酔併用全身麻酔時に必要な最小限セボフルラン濃度の検討 (2006)
  • 著者名/発表者名: 藤田義人、森島徹朗、祖父江和哉、勝屋弘忠
  • 雑誌名: 神経麻酔・集中治療プロシーディング 2006 ページ: 29-30
• [雑誌論文] Failure of the Airway Scope to reach the larynx
  • 著者名/発表者名: Nobuko Sasano, Hiroki Yamauchi, Yoshihito Fujita
  • 雑誌名: Can J Anesth2007 54(9) ページ: 775
  • 査読あり
• [学会発表] Investigation of blood lactate as an indicator for severity of a child undergone cardiac surgery (2008)
  • 著者名/発表者名: Yoshihito Fujita, Eisuke Kako, Yuichiro Mizuochi, Hironobu Iguchi, Kazuva Sobue
  • 学会等名: Annual Meeting of the American Society of Anesthesiologists
  • 発表場所: (ASA)in Orland, Florida
  • 年月日: 20081018-22
• [学会発表] Investigation of blood lactate level as indicator for severity assessment (2008)
  • 著者名/発表者名: Yoshihito Fujita, Tae Kato, Hirotada Katsuya
  • 学会等名: The 6^<th> International Shock Congress in Cologne
  • 発表場所: Germany
  • 年月日: 20080628-0702
• [学会発表] Minimum concentration of sevoflurane for adequate sedation with combined General-epidural anesthesia (2007)
  • 著者名/発表者名: Yoshihito Fujita, Hiroki Yamauchi, Masato Morita, Rina Kato
  • 学会等名: Annual Meeting of the American Society of Anesthesiologists
  • 発表場所: (ASA)in San Francisco
  • 年月日: 20071013-17
• [学会発表] Effect of mild hypothermia on the expression of aquaporin family in cultured rat astrocytes under hypoxic condition (2007)
  • 著者名/発表者名: Fujita Yoshihito, Sobue Kazuva, Morishima Tetsuro, Asai Kiyofumi
  • 学会等名: the 5th International Conference of Aquaporin in Nara
  • 発表場所: Japan
  • 年月日: 20070713-1316
• [学会発表] Restricted-Volume Replacement Reduces Blood Loss during Donor Hepatectomy for Liver Transplantation (2006)
  • 著者名/発表者名: Fujita Yoshihito, Katsuya Hirotada
  • 学会等名: 2006 Annual Meeting of the American Society of Anesthesiologists
  • 発表場所: (ASA)in Chicago
  • 年月日: 20061106-20