研究課題
1) GS細胞からのex vivo精子形成実験:(1) 皮下での精細管再構成実験-マウス・ラットの胎仔・新生仔の精巣細胞を酵素処理して細胞浮遊液とし、細胞外器質と混和してヌードマウス背部皮下に注入移植した。精細管の再構成が確認され、若干の生殖細胞も認められた。同様の方法においてHaspin-GFP-GS細胞を混和することにより、それらの細胞が再構成精細管内で分化し、GFPの発現を確認した。すなわち半数体細胞(精子細胞)までの精子形成を精巣外において成功した。それらの精子細胞の妊孕能を確認するために、顕微授精を行い、健康な産仔を得た。(2) 精巣内での精細管再構成実験-(1)と同様の手法で、精巣間質において精細管再構成実験をおこなった。しかし、精細管の間に広がった細胞の再構成は効率が悪く、精子形成は確認できなかった。2) 精子組織を用いた器官培養実験:Haspin-GFPトランスジェニックマウスの仔(3〜14日齢)の精巣組織(直径1〜2mm)を培養液面上において、32℃、5%CO_2にて培養を行った。7日齢以後の精巣組織を用いた場合にはHaspin-GFPの発現が確認できた。しかし、6日齢以前の精巣組織を用いた場合は、組織学的には精母細胞の出現を認めたが、GFPの発現は明らかではなかった。Haspin-GFPの発現は精子細胞の存在を強く示唆すること、7日齢精巣には精母細胞はまだ存在していないことから、in vitro器官培養において減数分裂の完了が可能であることが示唆された。Haspin-GFPの発現を目印に、至適な培養条件の検討をおこない、34℃、10%牛胎児血清、各種ビタミン、等々が必要であることが明らかとなった。
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