| 研究課題/領域番号 |
18591817
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
小森 慎二 兵庫医科大学, 医学部, 助教授 (60195865)
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| 研究分担者 |
霞 弘之 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (00289068)
堀内 功 兵庫医科大学, 医学部, 助手 (70340974)
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| キーワード | 精子形成過程 / TCTP / アンドロゲン / セルトリ細胞 |
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| 研究概要 |
アンドロゲンのTCTPへの発現調節の検討
1)Gel shift法によるアンドロゲン作用領域の同定TCTP遺伝子5'上流領域を9つの断片に分けて検討したところ、ひとつの断片(-700bp1から-500bo)に、核蛋白が結合したことが判明した。
2)Luciferase assayによる発現調節断片の検討
上記で同定した5'上流領域断片をluciferase遺伝子の上流に導入することに成功した。現在この断片についての発現への影響を検討中である。
1.マウス精巣にてのandrogenのTCTP発現調節への検討
2.アンドロゲン分泌を抑制した雄マウスの作成
3.雄のBalb/cマウスにGonadotropin releasing hormone agonist(GnRH agonist)であるleuprolide chlorideとアンドロゲンに拮抗するflutamideを投与する。投与後4週間後にマウス精巣を摘出する。また、GnRHagonist投与群にはtestosteroneを投与し、1週後、2週後、3週後、4週後と同じくマウス精巣を摘出する。
1)Laser microdissection法によるSertoli細胞の回収
上記の精巣の凍結切片を顕微鏡下観察して、精細管内のsertoli細胞をLaser microdissection法にて回収し。その細胞よりmRNAを分離することに成功した。
2)RT-PCR法によるTCTP遺伝子の発現量の解析
発現量を検討したとことろ、Fulutamideにて有意に発現が増強された。一方およびGnRH agonistによる作用とtestosteroneによる作用では有意な差は認めなかった。
以上より、アンドロゲンはTCTPの発現に関与することが示唆された。今後さらに詳細に検討する予定である。
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