研究課題/領域番号 |
18591819
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研究機関 | 国立成育医療センター(研究所) |
研究代表者 |
林 聡 国立成育医療センター(研究所), 生殖医療研究部, 共同研究員 (60425717)
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研究分担者 |
秦 順一 国立成育医療センター(研究所), 名誉総長 (90051614)
梅澤 明弘 国立成育医療センター(研究所), 生殖医療研究部, 部長 (70213486)
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キーワード | 生殖医学 / 周産期 / 胎児治療 / 造血幹細胞 |
研究概要 |
前年度に引き続き下記の研究を継続した。胎児移植治療モデルの作成マウスを用いた胎児幹細胞移植治療モデルにより、キメラマウスを作成した。このキメラマウスに対し、侵襲の少ないプロトコールを用いた細胞移植によりドナーキメリズムの増幅が可能であることを証明した。免疫トレランスのメカニズムの解明マウス胎児への細胞移植後、免疫組織化学を用いた組織染色を行い、移植細胞の胎児への生着率を検討した。SJL/Jマウスの骨髄から採取した造血幹細胞を5×10^6細胞/胎児に調製した後、胎児疾患マウス(血液疾患マウスあるいは代謝病疾患マウス)の腹腔内に投与を行う。胎齢20日に分娩となった新生児マウスを飼育し、生後4週間目となる時期にマウス末梢血を採取し、単核細胞を抽出し、ドナー特異的な抗体を結合させたのち、フローサイトメトリーを用いてドナー細胞の生着率について解析した。治療効果が十分得られるレベルのキメリズムの獲得が可能な治療法の開発ドナー細胞が生着したキメラマウスを用いて、その疾患マウスに出現する症状の改善の有無と程度について検討を行なった。またドナー細胞生着率と症状改善の程度に関しての検討も同時に行った。ドナー細胞が生着しても臨床症状が改善されない場合、低線量の放射線あるいは低量の化学療法を行った後(生体に副作用が及ばない量であり、かつ通常の移植では生着が成功しない極微量な量を用いる)、骨髄造血幹細胞の2次移植を行った。その後、同様にドナー特異的な抗体を用いてドナー細胞の生着率を分析し、その疾患マウスの症状の改善の有無と程度について解析した。研究費は、研究試薬、実験動物および培養器具の購入、学会参加旅費、研究補助者への賃金として使用した。
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