| 研究課題/領域番号 |
18591874
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
蓑田 涼生 熊本大学, 医学薬学研究部, 講師 (30284772)
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| 研究分担者 |
増田 聖子 熊本大学, 医学部附属病院, 助教 (70346998)
村上 大造 熊本大学, 医学部附属病院, 助教 (70398212)
松吉 秀武 熊本大学, 医学薬学研究部, 助教 (30404338)
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| キーワード | 内耳再生 / 有毛細胞 / 遺伝子治療 / ウイルスベクター |
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| 研究概要 |
InvitroではラットにおけるPC3遺伝子の発現時期、局在について検討を行った。PC3は胎生期内耳、生後内耳に存在することをRT-PCR、免疫染色にて確認した。当初、市販のPC3抗体を複数種類用い免疫染色を行なった。しかし、その後培養線維芽細胞(COS7)にPC3遺伝子導入を行い、これらPC3抗体で免疫染色を行った結果、有意なPC3の発現は認めなかったことから、これら市販の抗体の品質に問題があると考え、PC3研究の世界的権威であり、小脳におけるPC3の免疫染色の経験のあるItalyのDr Tironeに抗体の供与を依頼・入手後、再度培養線維芽細胞にPC3遺伝子導入を行い、供与を受けた抗体を用いて免疫染色を行った。その結果、線維芽細胞に明確なPC3の発現を認めたため、最終的にこの抗体を用い蝸牛における検討を行った。その結果、PC3はラセン神経節細胞細胞質に発現しており、これは内耳におけるMath1の発現様式と明らかに異なるものであった。小脳顆粒細胞におけるPC3の働きのようにMath1の発現を上流で制御している可能性は高くないかもしれない。この点については、現在胎生期内耳原基でのPC3の免疫染色を引き続き現在行なったおり、またさらにエレクトロポーレーション法を用いてPC3の機能について解析を行なう予定である。
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