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2006 年度 実績報告書

内耳特異的コネキシン26結合分子の同定と聴力障害機構の解析

研究課題

研究課題/領域番号 18591876
研究種目

基盤研究(C)

研究機関札幌医科大学

研究代表者

小海 康夫  札幌医科大学, 医学部, 教授 (20178239)

研究分担者 氷見 徹夫  札幌医科大学, 医学部, 教授 (90181114)
稲垣 真澄  国立精神・神経センター, 室長 (70203198)
キーワード神経科学 / プロテオーム / 難聴 / 内耳 / 生体分子
研究概要

感音難聴の30-50%にコネキシン26(Cx26)をコードするDFNB1/GJB2の変異が認められ、Cx26の機能異常は感音難聴の中心的な要因をなす。しかし、なぜCx26の変異が、聴力に障害をもたらすのか。なぜ高周波音での異常がもたらされやすいのかなど、多くの点が不明である。Cx26の生理機能を明らかにすることが難聴発症のメカニズム解明につながる。その目的のために内耳特異的なCx26結合分子を同定する目的で以下の実験を施行した。
(1)タンパク質分子間相互作用は、遺伝子工学によって解析することは大変困難である。また、内耳は極めて微小な器官であるため、大量の蛋白質を抽出精製することも不可能である。それゆえ、Cx26にFLAGをつけた機能的なCx26をトランスジェニックにて発現する遺伝子組み換えマウスを作成する。
(2)内耳、腸などでの結合蛋白質の解析を質量分析を用いて比較する(Differential display)ことによってのみ結合蛋白質の解析が可能な系を確立する。
本年度は、Cx26を安定して発現する遺伝子組み換えマウスを作成した。マウスクラスI抗原プロモーター下にFLAGにてラベルしたCx26cDNAを結合したトランスジーンを作成し、受精卵にインジェクションし遺伝子組み込みをサザン法PCR法にてスクリーニングした。その結果2ラインのFLAG-Cx26を安定に発現するトランスジェニックマウスが得られた。さらに、これらのマウスの聴力検査を行い、正常の聴力であることを確認した。次に、得られたトランスジェニックマウスにおけるFIAG-Cx26タンパク質の発現を免疫染色にて組織レベルで確認した。様相どおり、ほぼ全身にトランスジーンのタンパク質発現が確認された。(739文字)

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2007 2006

すべて 雑誌論文 (2件) 産業財産権 (1件)

  • [雑誌論文] Anti-tumor effects of dehydroaltenusin, a specific inhibitor of mammalian DNA polymerase alpha2007

    • 著者名/発表者名
      Maeda N, Kokai Y, Ohtani S, Sahara H, Kamisuki S, Takahashi S et al.
    • 雑誌名

      BBRC 352

      ページ: 390

  • [雑誌論文] リポソームをリガンドとして用いた血漿蛋白質のプロテオミクス解析2006

    • 著者名/発表者名
      木村成寿, 相馬仁, 苗代康可, 小海康夫
    • 雑誌名

      生物物理化学 50

      ページ: 231

  • [産業財産権] リポソームをリガンドとして用いた体液タンパク質の解析方法および体液タンパク質の調整方法2006

    • 発明者名
      相馬仁, 苗代康可, 小海康夫
    • 権利者名
      北海道
    • 産業財産権番号
      特願2006-193711
    • 出願年月日
      2006-07-14

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公開日: 2008-05-08   更新日: 2016-04-21  

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