| 研究課題/領域番号 |
18591950
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
吉田 英生 千葉大学, 大学院医学研究院, 助教授 (60210712)
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| 研究分担者 |
菱木 知郎 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (00375776)
斉藤 武 千葉大学, 医学部附属病院, 助手 (20406044)
光永 哲也 千葉大学, 医学部附属病院, 医員 (80375774)
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| キーワード | 炎症性腸疾患 / 腸管粘膜免疫 / プロバイオティクス |
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| 研究概要 |
動物実験
実験動物:SDラット
実験群:D群:3%デキストラン硫酸(DDS)溶解水を7日間飲水させ8日目より通常水に変更、DDS投与開始より2週間後、犠死し、全結腸を摘出。
W群:コントロール群、通常水を飲水。
検討項目:飼料摂取量、体重変化、便性、下血、摘出標本の病理組織
結果:D群において飼料摂取量はDDS投与期間中減り続けた。体重もDDS投与直後より減少し、DDS投与終了後も11日目まで減少傾向にあった。下痢はDDS投与3日目より認められ始め、4日目にはすべてのラットに下血を認めた。摘出結腸の長さはW群に比べ短く、病理組織像では炎症性細胞浸潤を伴った潰瘍やびらんを認めた。
臨床的検討
目的:消化管粘膜局所のサイトカインプロファイルを明らかにする。
検体:血液およびバイオプシー検体あるいは手術検体より採取した消化管粘膜
測定方法:血清のサイトカイン蛋白をELISAで、血球のサイトカインmRNAおよび消化管粘膜のサイトカインmRNAをreal time PCR法にて測定する。
検討項目:ワンステップでRNAの抽出が可能なRNA結合メンブレンをもちいて検体処理を試み、平均74.5μgという非常に高い収率でRNAを回収することが可能であり、real time PCRでの解析を行う上では十分な量のRNAと考えられた。この方法を用いることにより、バイオプシー検体でも十分mRNAの解析が可能であることが確認できた。消化管粘膜には多量の常在細菌やウイルスが存在するため、実際にhuman由来のgeneがdetect可能かどうかを通常のRT-PCRにて確認し十分なバンドが得られた。これにより回収したRNAはhostとしてのhuman由来のRNAも十分含まれていることを確認した。
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