| 研究概要 |
ヒトパピローマウイルス(HPV)が種々の前癌ならびに癌病変に検出されることから,HPV感染と発癌との関連が多くの注目を集めている.しかし,HPVには種特異性があり,HPVは動物に感染しないことから,HPVについてのin vivoでの感染実験を用いた癌化の証明は不可能である.我々は,dimethyl benzanthracene(DMBA)を用いて6-8週という短期間にハムスターの口腔粘膜に扁平上皮癌を誘発できる実験系を確立した.この病変から新しいハムスター口腔パピローマウイルス(HOPV)の分子クローニングを行い,この発癌モデルにおけるHOPVの関与について解析した結果,癌化過程でHOPVが重要な働きをしていることが明らかになった.このハムスターHOPV発癌モデルを用いてDNAワクチンよる癌化抑制についての検討を行なった.HOPVのE6,E7,L1,L2領域などの主要遺伝子のnaked pDNAおよびDNA複合体(pDNA/プルラン複合体)のDNAワクチンよる癌化抑制を解析したところ,naked pDNAよりもDNA複合体の方がより癌化抑制が良好なことが判明した.また,その投与方法,特に部位についての検討を行なった.HOPVのゲノムを培養細胞に発現させ,各主要遺伝子を増幅して発現プラスミドに挿入し,HOPVのnaked pDNAおよびDNA複合体を作成した.これらのHOPVのnaked pDNAおよびDNA複合体を上記の発癌モデルの筋肉内,皮下および口腔粘膜に接種して,その効果を検索したところ,HOPVのゲノムの主要遺伝子,特にE6,E7,L1領域のnaked pDNAおよびDNA複合体を口腔粘膜および筋肉内に接種したときに,特に筋肉内接種時に癌抑制効果が高いことが示唆された.この実験系を用いて,HOPVのE6,E7,L1領域などの主要遺伝子のnaked pDNAおよびDNA複合体の細胞取り込みを詳細に解析したところ,naked pDNAよりもDNA複合体の方がより取り込みが良好なことが判明した.また,投与部位としては,口腔粘膜および筋肉内が効果があり,さらに,電気穿孔法を併用することが有用なことも明らかになった.これらの結果から,DNAワクチンの投与部位として口腔粘膜および筋肉が良く,DDSとしてプルラン複合体を用いて,さらに電気穿孔法を行うとより効果が高くなることが示唆された.
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