| 研究概要 |
1.リボゾームの生合成の評価
HSC-2細胞におけるangiogenin発現の抑制により,銀染色によるnucleolar organizer regions (NOR)のドット数は低下した。
2.リボゾームRNA (rRNA)の合成能の評価
32P-orthophosphateで30分ラベルしたangiogenin RNAi transfectant (Ang-RNAi)とvector control transfectant (Vector cont.)から全RNAを抽出しオートラジオグラフィにより新たに合成されたRNAを検出し評価した。HSC-2細胞におけるangiogenin発現の抑制により,45S rRNA産生量は低下した。
3.PI3K-Akt-mTOR経路の検討
HSC-2細胞のAng-RNAiとVector cont.の対数増殖期において蛋白を回収し,Akt (Ser473)およびmTOR (Ser2448)のリン酸化をWestern blot法にて調べた。Ang-RNAiではAktのリン酸化が減少した。しかしながら,Ang-RNAiとVector cont.で,mTORのリン酸化には違いは認められなかった。
4.動物実験
ヌードマウスの背部皮下にVector cont.およびAng-RNAiの両HSC-2細胞,800000個をそれぞれ植え付け4週後に屠殺し,腫瘍組織を採取した。Angiogeninの発現抑制はin vivoでのHSC-2細胞の腫瘍増殖を著明に低下させた。一方,8000000個のVector cont.およびAng-RNAiの両SCCKN細胞を植え付け,4週目で腫瘍径は両細胞とも約3mmに達したが,腫瘍組織の成長が非常に遅く評価不能であった。
以上から,angiogeninは腫瘍血管新生作用のみならず癌細胞におけるリボゾーム産生とPI3K-Akt経路を介しても口腔癌の増殖・進展に関与すると考えられた。
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