| 研究概要 |
本研究では、口腔常在菌Streptococcus gordoniiのランダムックアウトライブラリを用い、分子生物学的手法に基づく混合バイオフイルムのスクリーニング方法を新規開発することにより、S.gordoniiのどの様な分子が歯周病原性菌Porphyromonas gingivalisとの混合バイオフイルム形成過程に関与するのかを明らかにすることを目的としている。今年度の研究により、我々はニトロセルロース膜を用いた混合バイオフイルムの大量スクリーニング方法を新規開発し、その再現性を確認した。また同法を用い、約1000株のS.gordoniiランダムノックアウト株のスクリーニングを終了した。スクリーニング終了時点で、単一菌種バイオフイルム形成能は有するがP.gingivalisとの混合バイオフイルム形成能が欠如しているS.gordonii 19株が選出された。これらの株において、ノックアウトされている遺伝子をArbitary-Primed PCR法を用いて同定し、混合バイオフイルム形成に関与する10遺伝子を明らかにした。これらの遺伝子群は、その推定機能により以下のような4つのグループに大別された。i)菌体内および菌体間シグナル伝達(cbeおよびspxB),ii)細胞壁生合成と菌体表層凝集素タンパク質の構造維持(murE,msrAおよびatf),iii)莢膜生合成(pgsAおよびatf),iv)生理機能(gdhA,ccmAおよびntpB)。さらに、同定された遺伝子について、各々に特異的ノックアウト株およびコンプリメント株を作成し、P.gingivalisとの混合バイオフイルム形成能を野生株と比較したところ、全ての特異的ノックアウト株において形成能の低下が認められ、またそれらのコンプリメント株では形成能の回復が確認された。
|
