世界的流行の兆候を示す新型病原大腸菌の国内における食品汚染実態と汚染源の究明

2006 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18602001
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 大阪市立大学
• 研究代表者: 西川 禎一 大阪市立大学, 大学院生活科学研究科, 教授 (60183539)
• 研究分担者: 小笠原 準 大阪市立環境科学研究所, 微生物保健課, 研究主任 (00270760)
• キーワード: 下痢原性大腸菌 / リアルタイムPCR / マルチプレックス / 食品 / スクリーニング / 疫学 / 汚染源 / 汚染経路

研究概要

食品中の下痢原性大腸菌(DEC)を迅速適確に検出するには、増菌後の培養液を試料とする効率的なスクリーニング方法を確立する必要がある。志賀毒素産生性大腸菌・腸管毒素原性大腸菌・腸管病原性大腸菌・腸管侵入性大腸菌・腸管凝集接着性大腸菌・分散接着性大腸菌・EAST1遺伝子保有大腸菌の8種類の病原遺伝子(stx1、stx2、eae、est(STp)、est(STh)、elt、aggR、astA、virB、afaB)を標的として、リアルタイム・マルチプレックスPCR法の応用を試みた。設計したプライマーおよびプローブは十分な特異性を示し、100株の大腸菌株およびその他の細菌株を用いた試験において、偽陽性を示した菌株はなかった。偽陰性を示す志賀毒素産生性大腸菌が1株あったが、プライマーとの反応および遺伝子の増幅に異常が認められなかったことから、プローブ結合部位の塩基配列に変異があり、そのためにリアルタイムPCR装置が増幅反応を検知できなかったものと考える。純培養菌液を用いた各マルチプレックス・リアルタイムPCR法の検出限界は、遺伝子の種類により異なったが約10^3-10^4cfu/mlであり、良好な感度を示した。また、マルチプレックス反応時に遺伝子間で初期鋳型量に大きな差がある競合的な条件下(各病原遺伝子陽性株のテンプレートDNAの割合が10^5:1または10^6:1)でも、濃度差がない場合と同程度に検出および定量することが可能であった。試験的に148件の食品増菌培養液をスクリーニングしたところ41検体(28%)から上記の病原遺伝子が検出された。本手法はDECの網羅的スクリーニングに極めて有効な手段になると期待され、19年度は本手法を用いて広範な疫学調査を実施する予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Prevalence of enteric bacteria that inhibit growth of enterohaemorrhagic Escherichia coli 0157 in humans (2007)
  • 著者名/発表者名: Toshima, H., Y., Hachio, M., Ikemoto, Y., Ogasawara, J., Hase, A., Takahashi, K., Masaki, H., Nishikawa, Y.
  • 雑誌名: Epidemiology and Infection 135・1 ページ: 110-117
• [雑誌論文] Epithelial cells secrete interleukin-8 in response to adhesion and invasion of diffusely adhering Escherichia coli lacking Afa/Dr genes (2006)
  • 著者名/発表者名: Meraz, I.M., Arikawa, K., Ogasawara, J., Hase, A., Nishikawa, Y.
  • 雑誌名: Microbiology and Immunology 50・3 ページ: 159-169
• [雑誌論文] Investigation of diarrhoeic faecal samples for enterotoxigenic Shiga toxin-producing and typical or atypical enteropathogenic Escherichia coli in Kashmir, India (2006)
  • 著者名/発表者名: Wani, S.A., Nabi, A., Fayaz, I., Ahmad, I., Nishikawa, Y., Qureshi, K., Khan, M.A., Chowdhary, J.
  • 雑誌名: FEMS Microbiology Letters 261・2 ページ: 238-244
• [雑誌論文] Shiga toxin-producing Escherichia coli and enteropathogenic Escherichia coli in healthy goats in India : occurrence and virulence properties (2006)
  • 著者名/発表者名: Wani, S.A., Samanta, I., Munshi, Z.H., Bhat, M.A., Nishikawa, Y.
  • 雑誌名: Journal of Applied Microbiology 100・1 ページ: 108-113
• [雑誌論文] Molecular typing to trace Listeria monocytogenes isolated from cold-smoked fish to a contamination source in a processing plant (2006)
  • 著者名/発表者名: Nakamura, H., Tokuda, Y., Sono, A., Koyama, T., Ogasawara, J., Hase, A., Haruki, K., Nishikawa, Y.
  • 雑誌名: Journal of Food Protection 69・4 ページ: 835-841
• [図書] 「食生活をおびやかす食中毒と感染症」食環境科学入門 食の安全を環境問題の視点から(山口英昌編著) (2006)
  • 著者名/発表者名: 西川禎一
  • 総ページ数: 117-136
  • 出版者: ミネルバ書房
• [図書] 「EAST1遺伝子astA保有大腸菌の下痢原性に注意」「分散接着性大腸菌検査時のひと工夫」;食中毒検査・診療のコツと落とし穴(渡辺治雄編著) (2006)
  • 著者名/発表者名: 西川禎一
  • 総ページ数: 11, 61
  • 出版者: 中山書店