B型肝炎ウイルスS粒子形成能を利用した異種蛋白のS粒子表面上での発現と応用

2006 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18659130
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 上田 啓次 浜松医科大学, 医学部, 教授 (00221797)
• キーワード: HBV / HBs / 粒子形成 / ワクチン

研究概要

HBV-small S(SS)蛋白の粒子外領域を異種蛋白で入れ替えた発現ベクターの構築と培養細胞系での発現及び粒子形成能について検討した。
1)SS蛋白N端のシグナル部分-異種蛋白粒子外領域-SS膜貫通領域の哺乳類発現ベクターの構築.異種蛋白粒子外領域をカセットでかつ3つの読み取り枠に対応できるようなデザイン-SS蛋白N端のシグナル部分-タグ(HAやFLAGなど)マルチクローニングサイト(MCS)-SS膜貫通領域からなるベクターを3種の読み取り枠で構成する。これを培養細胞発現プロモーター下流に導入して異種蛋白粒子形成HBs発現ベクター(heterologous protein expression HBs vector=hpHBsベクター)を構築した。
2)培養細胞への導入と発現上記のベクターを培養細胞ヘトランスフェクションし細胞内、細胞外における蛋白産生能をウェスタンプロット法で検討した。
結果として上記発現ベクターによる目的蛋白の発現は極めて悪いことが解った。別途作製した単純にHBsのN末にマルチクローニングサイトを付加した構築(約70アミノ酸の付加)、FLAGなどの短いタグの付加(約20アミノ酸)、C末にV5・His6の付加(約20アミノ酸)の構築のうち、前2者で良好な発現がみられた。現在、このコンスロラクションを基礎に異種蛋白の挿入・発現、粒子形成の検討を行っている。

研究成果

• [雑誌論文] KSHV RTA induces a transcriptional repressor, HEY1 that represses rta promoter. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yada, K., Do, E., Sakakibara, S., Ohsaki, E., Ito, E., Watanabe, S., Ueda, K.
  • 雑誌名: Biochem, Biophys. Res. Comm. 345 ページ: 410-418
• [雑誌論文] Lack of a Mechanism of Faithful Partition and Maintenance for the KSHV Genome. (2006)
  • 著者名/発表者名: Ueda, K., Sakakibara, S., Ohsaki, E., Yada, K.
  • 雑誌名: Virus Research 122 ページ: 85-94
• [雑誌論文] KSHVの遺伝子とその産物.ヘルペスウイルス学-基礎・臨床研究の進歩 (2006)
  • 著者名/発表者名: 矢田佳織, 大崎恵理子, 上田啓次
  • 雑誌名: 日本臨床 64 ページ: 538-542
• [雑誌論文] KSHVの潜伏感染と再活性化機構.ヘルペスウイルス学-基礎・臨床研究の進歩- (2006)
  • 著者名/発表者名: 大崎恵理子, 矢田佳織, 上田啓次
  • 雑誌名: 日本臨床 64 ページ: 589-593