| 研究課題/領域番号 |
18659549
|
|---|
| 研究機関 | 大阪大学 |
|---|
研究代表者 |
上崎 善規 大阪大学, 歯学研究科, 教授 (40116017)
|
|---|
| 研究分担者 |
和田 孝一郎 大阪大学, 歯学研究科, 助教授 (90263467)
佐伯 万騎男 大阪大学, 歯学研究科, 講師 (30273692)
|
|---|
| キーワード | アポトーシス / カスパーゼ3 / カルシウム / 培養細胞 / カルシニューリン / Monad |
|---|
| 研究概要 |
ラット胎児脳よりゲル濾過、二次元電気泳動法により同定されたカスパーゼ3結合タンパク質の部分アミノ酸シーケンスから相同性検索を行い、カルシニューリンBおよび今回我々がMonadと命名した新規タンパク質がその候補として浮上してきた。
カルシニューリンBはリン酸化タンパク質の脱リン酸化酵素活性をもつカルシニューリンAの制御たんぱく質で、ほぼ普遍的にあらゆる細胞に存在している。その分子量的解析では、酵素活性サブユニットは必要とせず、単独でカスパーゼ3と結合する可能性が考えられた。培養細胞系を用いて、カルシニューリンBをsiRNAでノックダウン、あるいは、遺伝子導入によりその発現を増強させて、TNFα刺激などによる細胞死誘導に対する関与を明らかにしつつある。
一方、MonadはApaf-1と同じくWD40リピートを持ち、357個のアミノ酸で構成されている分子量4万のタンパク質であるが、これまでその機能が知られていなかった。今回RT-PCRにより各種組織を検索したところ、精巣に最も発現が強いものの、それ以外の心、腎、骨格筋などの組織にも多く存在することが判明した。しかし、ラット神経系では、予測に反して、胎児期よりも生後にその発現が増強していた。ところが、遺伝子導入によりMonad発現を増強したHEK293細胞に対して、TNFα刺激を行ったところ、カスパーゼ3活性の増強を介して、細胞死が増強されていることが明らかとなった。従って、このMonadとラット胎児脳から得られたカスパーゼ3結合・アポトーシス促進タンパク質の関連性を明らかにしつつある。
|
