染色体構造タンパク質の相互作用ネットワーク解析

2007 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18681032
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 内山 進 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教 (90335381)
• キーワード: 染色体 / 高次構造 / 分裂期 / クロマチン / コンデンシ / 複合体

研究概要

本年度は実施計画に記載した以下の4つの研究を実施した。(1)ヒトコンデンシン立体構造解析と相互作用解析、(2)HP1BP74のクロマチン高次構造における役割解明、(3)HPlBP74のin vivoにおける相互作用解析のためのベクター構築、(4)ヒストンシャペロンNAP-1の会合状態解析である。(1)はコンデンシンヒンジ2量体の2量体形成を質量分析装置により確認後・結晶化を行い,良好な結晶化を得ることに成功した。得られた結晶を用いてSPring8において測定を行ったところ、分解能2.5A程度の回折像を得ることに成功した。これまでに報告されている結晶構造を用いての位相決定は不可能であったため、現在、SeMe置換体の作製を行っている。一方、Mycタグを付加したヒンジを細胞内で発現させ、免疫沈降によりコンデンシシ複合体を単離することにより、各サブユニット間の相互作用状態を明らかにすることに成功した。(2)についてはヒト組換ピストンを大量調製し、ヌクレオソーム再構築を行い、そこに組換HPIBP74を添加することにより検討を行った。ピストンHlと同様にクロマトソームが形成されればクロマトソームストップが観察されることとなる。その結果、HPIBP74がピストンHlと同様の位置に結合し、クロマチン高次構造形成に寄与していることが分かった。次に、TAP(Tandem Affinity Purification)システムを用いた(3)HPlBP74の免疫沈降を行うために、TAPベクターの入手、およびHPlBP74の挿入を行った。すでにベクターの構築は完了したため、来年度はTAPシステムによる免疫沈降、質量分析による同定を行い、HPIBP74を中心とした相互作用ネットワークを明らかにする。(4)については、米国の研究者との共同研究により超遠心分析を実施し、これまでに報告されていない会合状態を明かとすることが出来た。

研究成果

• [雑誌論文] The Arabidopsis SDG4 contributes to the regulation of pollen tube growth by methylation of histone H3 lysines 4 and 36 in mature pollen. (2008)
  • 著者名/発表者名: Cartagena, J, A., Matsunaga, S., Seki, M., Kurihara, D., Yokoyama, M., Shinozaki, K., Fujimoto, S., Azumi, Y., Uchiyanma. S., Fukui, K.,
  • 雑誌名: Dev. Biol. In press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Thermal unfolding mechanism of lipocalin-type prostaglandin D synthase. (2008)
  • 著者名/発表者名: Iida, T., Nishimura, S., Mochizuki, M, Uchiyama, S., Ohkubo, T., Urade, U., Tanaka, A., and Inui, T.
  • 雑誌名: FEBS J. 275 ページ: 233-241
  • 査読あり
• [雑誌論文] Anti-peptide antibodies for examining the conformation, molecular assembly, and localization of an intracellular protein, ribosormal protein S6, in vivo. (2008)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa, M., Ohmido, N., Ishikawa, K., Uchiyama, S., ukui, K., and Azuma, T.
  • 雑誌名: J. Biochemistry 143 ページ: 325-332
  • 査読あり
• [雑誌論文] H1.X with different properties from other linker histones is required for mitotic progression. (2007)
  • 著者名/発表者名: Takata, H., Matsunaga, S., Morimoto, A., Maniwa-Ono, R., Uchiyama, S., Fukui, K.
  • 雑誌名: FEBS Lett. 581 ページ: 3783-8
• [雑誌論文] Calcite-specific coupling protein in bamacle underwater cement. (2007)
  • 著者名/発表者名: Mori, Y., Urushida, Y., Nakano, M., Uchiyama, S., Kamino, K.
  • 雑誌名: FEBS J. 274 ページ: 6436-6446
  • 査読あり
• [雑誌論文] PHB2 protects sister chromatid cohesion in mitosis. (2007)
  • 著者名/発表者名: Takata, H., Matsunaga, S., Morimoto, A., Ma, N., Kurihara, D., Maniwa-Ono, R., Nakagawa, M., Azuma, T., Uchiyama, S., Fukui, K
  • 雑誌名: Current Biology 17 ページ: 1356-61
  • 査読あり
• [雑誌論文] Roles of short connecting desulfide bond in the stability and function of psychrophilic Shewanella violacea cytochrome c5 (2007)
  • 著者名/発表者名: Ogawa, K., Sonoyama, T., Takeda, T., lchiki, S., Nakamura, S., Kobayashi, Y., Uchiyama, S., Nakasone, K., takayama, S. J., Mita, H., yamamoto, Y., and Sambongi, Y.
  • 雑誌名: Extremophiles 11 ページ: 797-807
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fibrillarin, a nucleolar protein is required for normal nuclear morphology and cellular growth in HeLa cells. (2007)
  • 著者名/発表者名: Amin, M.A. Matsunaga, S., Ma, N., takata, H., Yokoyama, M., Uchiyama, S., Fukui, K.
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res, Comm 360 ページ: 320-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] Histone H2A Mobility is regulated by its tails and acetylation ofcore histone tails (2007)
  • 著者名/発表者名: Higashi, T., Matsunaga, S., Isobe, K., Morimoto, A., Shimada, T., Kataoka, S., Watanabe, W., Uchiyama, S., Itoh, K., and Fukui. K
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Comm. 357 ページ: 627-632
  • 査読あり
• [雑誌論文] Chromosome protein framework from proteome analysis of isolated human metaphase chromosomes. (2007)
  • 著者名/発表者名: Fukui, K. and Uchiyama. S.
  • 雑誌名: Chemical Rec. 7 ページ: 230-237
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nucleolin functions in nucleolus formation and chromosome congression (2007)
  • 著者名/発表者名: Ma, N., Matsunaga, S., Takata, H., Ono-Maniwa, R., Uchiyama, S. and Fukui, K.
  • 雑誌名: J. Cell Sci. 120 ページ: 2091-2105
  • 査読あり
• [雑誌論文] コラーゲンの三本鎖構造の熱安定性に及ぼす水和の効果 (2007)
  • 著者名/発表者名: 西 義則、山内 進、小林祐次
  • 雑誌名: 熱測定 34 ページ: 152-158
  • 査読あり
• [学会発表] 分裂中期ヒト染色体のプロテオーム解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 山内進、林原加代子、高田英明、小林昇平、松永幸大、福井希一
  • 学会等名: 分子生物学会、生化学会台同年会
  • 発表場所: バシフィコ横浜
  • 年月日: 2007-12-12
• [学会発表] 構成タンパク質から見たヒト染色体 (2007)
  • 著者名/発表者名: 山内進、林原加代子、高田英明、小林昇平、松永幸大、福井希一
  • 学会等名: 染色体学会
  • 発表場所: 総研大、葉山
  • 年月日: 2007-11-27
• [学会発表] Porteome analyses of human metaphase chromosomes (2007)
  • 著者名/発表者名: Susumu Uchiyama, Shouhei Kobayashi, Hideaki Takata, Sachihiro Matsunaga, and Kiichi Fukui.
  • 学会等名: International Chromosome Conference
  • 発表場所: RAL, Amsterdam
  • 年月日: 2007-08-28
• [図書] proteome analysis human metaphase chromosomes (2007)
  • 著者名/発表者名: Fukui, K. and Uchiyama, S.
  • 総ページ数: 22
  • 出版者: CRC Prss
• [図書] Isolation of human and plant chromosomes as nano-materials. (2007)
  • 著者名/発表者名: Uchiyama, S., Tomoyuki, D. and Fukui, K
  • 総ページ数: 12
  • 出版者: CRC Press
• [図書] On-Chip Chromosom Sorter Using Electric and Magnetic Fields (2007)
  • 著者名/発表者名: Inoue, T., Fujita, Y., Uchiyama, S., Doi, T., Fukui, K and Yokoyama, H
  • 総ページ数: 10
  • 出版者: CRC Press
• [図書] Anti-Peptide Antibodies for Examining the Conformation and Molecular Assembly of an Intracellular Protein (2007)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa, M., Ohmido, N., Ishikawa, K., Uchiyama, S., Fukui, K., and Azuma, T.
  • 総ページ数: 14
  • 出版者: CRC Press
• [図書] Structure and Interactions of the Imitation SWI-Type Chromatin-Remodeling Complex, ATPDependent Chromation-Assembly Factor (2007)
  • 著者名/発表者名: Ohkubo, T., Petkova-Andonova, M., Kojima, Y., Nakamura, S., Fjita, H., Nishi, Y., Nakano, H., Uchiyama, S., Fukui, K., and Kobayashi, Y.
  • 総ページ数: 14
  • 出版者: CRC Press
• [図書] Dynamic and Functional Analysis of Chromosomal Proteins (2007)
  • 著者名/発表者名: Ohmido, N., Uchiyama. S., Matsunaga, S., Nakagawa, M., azuma, T., and Fukui, T.
  • 総ページ数: 14
  • 出版者: CRC Press