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がん細胞が他臓器へと転移・浸潤するためには細胞外マトリックスを分解する必要がある。そのために、がん細胞は様々な細胞外マトリックス分解酵素を産生している。その代表的なものがマトリックス・メタロプロテアーゼ(MMP)群とヘパラナーゼである。前者は細胞外マトリックス中の種々のタンパク質を分解するのに対し、ヘパラナーゼは細胞外マトリックス中のヘパラン硫酸を分解することで、がん細胞の転移能を上昇させる。MMP群の活性化機構および阻害剤開発は進んでいるが、ヘパラナーゼのそれは不明な点が多いのが現状である。
本年度も引き続き、糖鎖修飾によるがん転移制御機構の解析のために、ヘパラナーゼの活性化における翻訳後修飾の役割について詳細な検討を行った。精製ヒト・ヘパラナーゼを用いて、MALDI-TOF質量分析法によりジスルフィド結合の同定を行った。その結果、Cys127とCys179およびCys437とCys542がそれぞれジスルフィド結合していること、さらにCys211がシステイン化されていることが確かめられた。変異体を用いた解析から、Cys211のシステイン化の役割は現時点で不明であるが、Cys127とCys179のジスルフィド結合の役割はヘパラナーゼの細胞外分泌に若干の促進効果が認められること、およびCys437とCys542のジスルフィド結合は、ヘパラナーゼのゴルジ体輸送、引き続き起こる細胞外分泌、そして、活性化に必須であることが示された。
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