| 研究概要 |
本研究では、ホスファチジルイノシトールリン酸化酵素PI3-kinaseが神経伝達物質の放出を制御する分子機構を解明することを目的としている。本年度は、ラット脳のシナプス小胞分画からのグルタミン酸およびGABAを含有するプレシナプス小胞の磁気ビーズによる単離方法の確立を行った。作製したvesicular glutamate transporter(VGluT), vesucular GABA transporter(VGAT)の抗体を磁気ビーズに化学的に架橋後、それぞれの抗体に結合する小胞を単離した。イムノブロットによって確認したところ、VGluTを含む興奮性シナプス小胞、VGATを含む抑制性のシナプス小胞を区別して単離できていることがわかった。これらのタンパク質のうちin vitroにおいてPI3-kinaseシグナルの下流に存在しているProtein kinase BおよびGSK-3βでリン酸化されるタンパク質を同定している。また、ホスファチジルイノシートルリン脂質に結合するとされるPICK1およびそのファミリータンパク質が神経伝達物質放出制御に関与しているかの検討を行った。その結果、PICK1およびファミリータンパク質Arfaptin2がシナプス小胞に結合していることがわかった。またArfaptin2をPC12細胞に強制発現させると神経伝達物質放出が抑制されることが明らかとなった。
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